Le Noyau Pt. II (suite et fin) Flashcards
Dans quel sens se fait le trafic par les pores nucléaires?
Bidirectionnel
De quoi est fait le pore nucléaire?
Complexe de prots, les nucléoporines
Quels sont les deux types de trafic à travers le pore nucléaire?
- Diffusion libre/passive
- Transport contrôlé
Quelles sont les propriétés du pore nucléaire?
- Canal aqueux
- Toujours ouvert
- 10 nm de diamètre
- Forme octogonale
Quelles molécules sont concernées par la diffusion passive ou simple?
Molécules de taille <10 nm ou de masse moléculaire <5000 Da (petites molécules ie ions, nucléotide…)
Quelles molécules sont concernées par le transport contrôlé?
Molécules de taille >10 nm ou de masse moléculaire >5000 Da
Quelles sont les caractéristiques du transport contrôlé?
- Nécessite une DILATATION du pore nucléaire
- Nécessite de l’énergie (ATPases)
- Transport sélectif
- Protéines traversent REPLIÉES
Comment peut-on observer les pores nucléaires?
Au ME à balayage, après cryofracture
Comment le nombre de pores varie-t-il?
En fonction du moment du cycle cellulaire: pendant l’interphase: nbr +++ en phase S, diminue après la phase S (-)
Comment met-on en évidence le trafic des protéines par les pores nucléaires?
Marquage avec un AA et de l’or colloïdal, puis observation au MET
Comment met-on en évidence le trafic des ARN par les pores nucléaires, ainsi que l’activité de transcription?
Marquage en incubant les ARN avec de l’URIDINE TRITIÉE, puis on ajoute sur l’échantillon du bromure d’argent et on observe au MET
Comment les nucléoporines reconnaissent-elles les prots?
Elles projettent des filaments de part et d’autre du pore qui vont reconnaître les molécules
Quelles molécules vont passer le pore nucléaire par transport contrôlé du cytoplasme vers le noyau?
- Enzymes du métabolisme des acides nucléiques:
- ADN et ARN poly + leurs cofacteurs
- Enzymes de maturation des ARN
- Enzymes de la réparation
- Prots de structure de la chromatine
- Prots de régulation (ie facteurs de transcription)
- Prots ribosomales
- Nucléolines
- Lamines
Quelles molécules vont passer le pore nucléaire par transport contrôlé du noyau vers le cytoplasme?
- ARNm (consomment ATP +++)
- Ribosomes
- ARNt
…
Quelle est la règle générale du trafic par le pore nucléaire?
Ne prend en charge QUE LES PROTS, donc si d’autres molécules doivent passer elles doivent le faire en s’associant à des prots
Quelles sont les caractéristiques des séquences d’adressage pour le trafic nucléaire?
- PAS localisées à endroit spé de la prot
- Différentes selon le trafic: NLS/NES
Qu’est-ce que la séquence NLS?
- Pour les prots importées dans le noyau
- Lysine +++
Qu’est-ce que la séquence NES?
- Pour les ports Exportées du noyau
- Leucine +++
Comment font les prots qui font des trajets d’aller et retour?
Elles ont à la fois des séquences NLS et NES
Qu’est-ce qui permet à certaines prot sd’être retenues dans le noyau?
Des signaux de rétention (séquences)
A quoi servent les protéines adaptatrices?
Aident à la reconnaissance de la prot par les nucléoporines
Quels sont les deux types de prots adaptatrices?
Importines : prot avec NLS
Exportines : prot avec NES
(makes sense)
Qu’est-ce que la protéine Ran et quelles sont ses propriétés?
- petite prot G monomérique
- Active avec GTP, inactive avec GDP
- Activité GTPase
Que fait, concrètement, la prot Ran?
Contrôle la direction du transport car il y a un gradient de ran-GTP dans la ç : [Ran-GTP] dans le noyau toujours > à [Ran-GTP] dans le cytoplasme
Pourquoi [Ran-GTP] dans le noyau toujours > à [Ran-GTP] dans le cytoplasme?
Car:
- Ran-GAP, qui induit l’activité GTPase de Ran n’existeque dans le cytoplasme
- facteur d’échange GEF, qui switche la GDP et GTP, n’existe que dans le noyau
Comment la protéine passe-t-elle le pore nucléaire?
Importine α reconnaît la séquence NLS. Elle est collée à l’importine β, qui est reconnue par les nucléoporines qui font passer le tout à l’intérieur du noyau
Que permet la protéine Ran-GTP?
Elle sépare la prot NLS des importines
Comment les importines et la Ran sont-elles recyclées?
Ran-GTP libère l’importine en hydrolysant son GTP dans le CYTOPLASME, puis la ran-GDP retourne dans le noyau pour switcher à nouveau au GTP
Comment les ARN font-ils pour sortir du noyau?
Ils doivent être associés à une prot car ne peuvent pas directement être reconnus par les exportines (-)
Exportine + prot NES + Ran-GTP sortent du noyau, puis l’hydrolyse du GTP permet la séparation du tout dans le cytoplasme
Comment la régulation des séquences NLS/NES procède-t-elle?
La protéine peut masquer ou dévoiler ces séquences, soit par repliement sur elle-même, soit par modifications type phosphorylation
Combien d’ARN poly existe-t-il chez les eucaryotes?
3
Que permet l’uracile?
Marquer la synthèse d’ARN dans la ç
Quel pourcentage de l’activité du noyau les 3 poly occupent-elles?
I : 37% (nucléole)
II : 60%
III : 3%
Quelles sont les fonctions des trois poly?
I : Synthèse de tous les ARNr SAUF le 5S
II : Synthèse des ARNm
III : Synthèse de :
- ARNt
- ARNr 5S
- ARN 7S de la particule SRPQuels types d’ARN les trois poly synthétisent-elles?
I : Stables, majorité des ARN cytoplasmiques
II : Instables, traduits en prots, 3% des ARN cytoplasmiques
III : Stables, 16% des ARN cytoplasmiques
Comment la demi-vie des ARNm varie-t-elle en fonction de la phase de l’interphase?
+ longtemps en phase S qu’en G1 et G2
Combien de copies d’ARN peut-on produire en 1H?
Env. 1000
Comment l’ARNm est-il coiffé?
Ajout d’une guanine méthylée en 5’, permet de marquer l’ARN comme ARNm et de protéger l’extrémité 5’
Qu’est-ce que la poly-adénylation?
Ajout d’une queue poly-adénylée au 3’. Signal d’exportation de l’ARNm : on y ajoute des prots à NES
Comment la chromatine est-elle modifiée pour pouvoir procéder à la transcription?
Fibre chromatinienne doit se déplier en nucléosomique -> phosphatases déphosphorylent les H1 et les HAT acétylent les lysine de la N-ter des histones pour que la fibre se déplie
Que se passe-t-il lors du passage de la poly?
Les nucléosomes se dissocient partiellement: il y a dissociation partielle de H2A et H2B (tout se réassocie normalement en fin de transcription)
Que permettent les séquences régulatrices?
le recrutement de facteurs de régulation de la transcription
Quand la réplication des chromosomes s’opère-t-elle?
Phase S du cycle cellulaire
Combien de temps la réplication des chromosomes prend-elle?
8 h
Comment met-on en évidence les origines de réplication?
Avec de la THYMIDINE TRITIÉE , molécule qui s’incorpore spé dans l’ADN en cours de synthèse
Quelle taille font les origines de réplication?
300 nt
A quelle fréquence trouve-t-on les origines de réplication?
Toutes les 20 000 à 100 000 paires de bases
De quelle manière les origines de réplication s’activent-elles?
pas toutes en même temps
Qu’est-ce que l’unité de réplication?
20 à 80 origines de réplication s’activant en même temps. Il y a plusieurs unités de réplication sur un chr
Que dire de la chronologie de réplication des chromosomes?
L’Euchromatine est répliquée avant l’hétérochromatine, en premier.
MNEMO : Ordre alphabétique : E before H
