Synapse immunologique

Question 1

Contrôle de l’activation spontanée

Answer 1

• L’activation spontanée d’aussi peu que 5-10 TCRs est assez pour enclencher une réponse cellule T
• Activation spontanée engendrerait des complications auto-immunes sévères.
• Les cellules T doivent être munis de mécanismes les protégeant de la phosphorylation spontanée (signalisation seulement quand ligand est reconnu)

Question 2

Mécanismes moléculaires du silencing immunologique : CD45

Answer 2

• Phosphatase toujours active
• Au repos, située à la PM colocalisée avec TCR
• 10 fois plus exprimée que TCR
• Directement liée à la maintenance de l’état déposphorylé des ITAMs
• 10 ITAMS par TCR

Question 3

Mécanismes moléculaires du silencing immunologique : Lck

Answer 3

• Au repos, 60% est primed/inactive.
  
  • Tyrosine inhibitrice (pY505), Tyr394 non-phosphorylée
• Même si retrouvée à la PM, comme le TCR, faible co-localisation avec le TCR
  
  • Démontré par FRET
    
    • Technique permettant la mesure de 2 protéine adjacentes (signal vert si adjacentes)

Question 4

Mécanismes moléculaires du silencing immunologique : CD3-ITAMs

Answer 4

• Premièrement cru comme ballotant dans le cytoplasme
• Association entre CD3-Cyt.
• Dom. et membrane plasmique
• Empêche la phosphorylation par Lck (tyrosine dans bicouche sont donc ne peuvent pas activés Lck)

Question 5

Les différents états du TCR

Answer 5

• Conformation réelle TCR : CD45 proche et Lck éloigné (ITAMs pas disponibles pour la phosphorylation)
• Recrute Lck pour dissocier les ITANs et éloigner CD45

Question 6

Synapse immunologique

Answer 6

• Interaction intime et prolongée en la cellule T et l’APC
• Engendre la réorganisation
  
  • Récepteurs de surface
  • Phoshatases et kinases
  • Cytosquelette
  • Organelles
  • Lipides
• Plusieurs avancées grâce aux nouvelles méthodes technologique
  
  • Création de cellules présentatrices artificielles planaires (Lipid bilayer APC)
  • Imagerie par réflexion totale interne (TIRF)

Question 7

Synapse immunologique : imagerie par TIRF

Answer 7

• On illuimine les cellules avec un laser qu’on envoie avec un grand angle d’incidence.
• Les indices de réfraction entre l’air, la vitre et le milieu de culture dans leque baignent des cellules cause une reflection complète des rayons lasers.
• Les imperfections dans la vitre permettent de créer une vague evanescente d’énergie ionisante.
• Permet donc d’imager des événements qui se produisent au site de contact entre la cellule et son substrat (ici ce sont les CPA artificielles)

Question 8

Synapse immunologique : combinaison CPA artificielles et imagerie par TIRF

Answer 8

• D’obtenir une image claire des événments qui se produisent au point de contact cT/CPA
  
  • Moins de bruit de fonds du reste de la cellule
  • Amélioration de la resolution des images
  • Amélioration de la detection spatio-temprorelle des événements.
• De suivre en simultané les différentes composantes impliqués dans la signalization et la synapse immunologique.

Question 9

Synapse immunologique : remodelage des récepteurs

Answer 9

• Aggrégation du TCR (1ERE ÉTAPE)
• Formation de ‘microclusters’ (MC) (TCR migre vers le centre de la cellule)
• Recrutement de CD4 ou CD8 (via CMH)
  
  • Lié à Lck et facilite la phosphorylation des ITAMs
• Recrutement de CD28 (dissocie des microagrégats du TCR)
  
  • Recrutement de PI3K, PKC-q
• Ségrégation du TCR, (kinetic segregation model)
  
  • CD45 (Phosphatase) ségréguée du TCR car trop grande
• Ségrégation tardive du TCR dans le cSMAC
  
  • LFA-1 (Adhésion) dans le pSMAC

Question 10

Positions SMAC

Answer 10

• distal = dSMAC (où point contact TCR et CMH)
• périphérique = pSMAC (accumulation protéines comme CD28)
• central = cSMAC

Question 11

Synapse immunologique : recrutement de kinases

Answer 11

• Lck
  
  • Présent dans les MCs précoces (têtes de flèches)
  • Absent dans les MC tardifs (flèche)
• ZAP70, PI3K (plus tardif que Lck frames 2 et 3)

Question 12

Synapse immunologique : remodelage du cytosquelette

Answer 12

• Actine périphérique: Polymérisation constante
• Transport MC précoces par exclusion (tapis roulant) (mouvement vers le centre de la cellule, transport passif)
• Charpente acto/myosine: via Myosine IIA
• Transport MC intermédiaires par transport actif.
• Tubuline: Relocalisation du MTOC (où va être cSMAC)
  
  • Établi un réseau de MT directionnel
  • Permet le transport de vésicules vers la synapse immunologique
    
    • Cytokines
    • Granzymes
  • Polarise la cellule pour la division
• Tubuline: Formation de fibre radiale
• Tubuline: Transporteur de microclusters tardifs

Question 13

Synapse immunologique : remodelage des organelles

Answer 13

• Vésicules de sécrétion dirigées vers le centre du contact (signal rouge)
  
  • Cytokines (CD4)
  • Granules cytolytique (CD8)
  • Implique TSG101, MTs

Question 14

Synapse immunologique : remodelage des lipides

Answer 14

• Hydrolyse de P-PtdIns par les PLC (d,g)
  
  • Accumulation de DAG (signal vert) à la synapse Imm.
• Phosphorylation de DAG par DGK:
  
  • Réduction du signal vert
• Voie hydrolyse PIP2 donc augmentation de DAG
• Perd signal vert donc shutdown signalisation
• Seulement voit où RCT interagit avec protéines

Question 15

Lipides anioniques : réduction à la synapse

Answer 15

• Changement au niveau de la charge de la membrane plasmique où contact RCT et cellule cible
• mRFP-RPre
  
  • Domaine C-term de Kras
  • Se lie à la PM par modifications covalentes:
    
    • Myristoylation (modifs de glycine)
    • Premylation (modifs de cysteines)
• Se lie à la membrane de manière électrostatiques
  
  • Suit la partition des lipides anioniques (migration vers le centre)
• PS : phosphatidylserine : lipide anionique (agrégation TCR après, permet de dissocier la membrane plasmique)
• exclusion de PS dans les micro clusters (MC)
• exclusion de PS en absence de signalisation

Question 16

À quoi sert la synapse immunologique

Answer 16

• À renverser le silencing immunologique sur tous les fronts

Question 17

Résumé synapse immunologique

Answer 17

• Engendre la réorganisation:
  
  • Récepteurs de surface
    
    • Recrutement de co-récepteurs (CD4, CD28) amène Lck
    • Exclusion des Phosphatases (CD45) éloigne TCR pour favoriser la phosphorylation
  • Lipides:
    
    • Diminution drastique de la charge négative de la PM aux MCs (chaines peuvent se dissocier)
    • Hydrolyse de PtdIns par PLC (génère DAG qui recrute PKC)
    • Exclusion de PS (relĉhe les chaînes CD3 de la membrane)
  • Kinases:
    
    • Recrutement de Lck, ZAP70, PI3K
  • Cytosquelette
    
    • Actine: augmente la surface de contact, transport initial des MCs
    • Tubuline: stabilise la cellule, transport tardif des MCs et organelles
  • Organelles
    
    • Augmente l’efficacité de transmission de l’activation paracrine en sécrétant cytokines directement aux APC
    • Augmente l’efficacité de cytolyse

Question 18

Synapse immunologique schéma résumé

Answer 18

• diapo 48

Question 19

Synapse immunologique BCR

Answer 19

• Moins évidente, mais simialire à celle du TCR

Question 20

En gros, la signalisation c’est quoi?

Answer 20

• Des récepteurs uniques à certains types cellulaires (TCR/BCR)
• Des kinases proximales spécifiques à ces récepteurs (Lck, Lyn)
• Des kinases secondaires sécifiques aux motifs de signalization spécialisés (ZAP70/Syk)
• Une plateforme d’amplification spécialisée pour un type cellulaire (LAT/Btk)
• Le reste, c’est pareil pour TOUTES les cellules

Question 21

Tableau comparaisons TCR et BCR

Answer 21

• diapo 72