Sujet 3 - Nutrition et croissance des microorganismes Flashcards
La croissance est définie par un accroissement du nombre de cellules ou de la masse cellulaire totale
Croissance des microorganismes
La courbe de croissance d’une population bactérienne se développant dans un milieu de culture liquide (système fermé; en ‘batch’ ou discontinue) peut être représentée par ___ de la concentration bactérienne (bact./ml) en fonction du temps d’incubation (heures).
le log 10
4 phases de croissance
- Latence,
- Exponentielle,
- Stationnaire et
- de mortalité
Phase d’adaptation dans laquelle il n’y a aucune division cellulaire
Phase de latence
La durée de la phase de latence varie en fonction (2)
- de l’âge des bactéries
- de l’origine (composition, température du milieu)
Phase de croissance exponentielle (log) (5)
- Accélération de la croissance des bactéries ainsi que de la division cellulaire
- Les microorganismes se développent et se divisent à la vitesse maximale
- La population est uniforme (propriétés chimiques et physiologiques)
- La phase de croissance exponentielle est de courte durée…
- Relation entre la concentration des nutriments et la croissance
Le nombre total de microorganismes viables reste constant (Équilibre entre division et mort cellulaire) (109 cellules/ml)
Stationnaire
Causes de la phase stationnaire (2)
- Limitation des nutriments
- Accumulation de déchets toxiques, acidité
Phase de mortalité (2)
- Arrêt de la division cellulaire
- Le nombre de bactéries viables ou cultivables diminue de façon constante en fonction du temps
Causes de la phase de mortalité (3)
- Dommages irréparables conduisant à une perte de viabilité
- Réponse génétique déclenchée (Mort cellulaire programmée)
- Formation de cellules viables non cultivables (VNC) (dormance)
Nommez les méthodes directes de la mesure de la croissance des microorganismes (2)
- Décompte total des microorganismes (dépend de la taille)
- Décompte des unités viables (capables de se reproduire)
Décompte total des microorganismes (mesure directe) - Compteur de cellules Coulter et Cytomètre de flux utilisé pour (3)
protistes, levures et cellules mammifères)
Décompte total des microorganismes (mesure directe) - Chambre de comptage observée au microscope (2)
- Hémocytomètre: Les levures et cellules mammifères
- Cellule de Petroff-Hausser: Les bactéries
Décompte total des microorganismes (mesure directe) - Avantages (2)
- Facile à utiliser, rapide et peu coûteux
- Informations sur la taille/morphologie des microorganismes
Dimensions: 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 1/10000 cm3
Cellules/ml: 10000 x cellules comptées x facteur de
dilution
Hémocytomètre
Dimensions : 10 fois plus petit que l’hémocytomètre
Cellules/ml: 100000 x cellules comptées x facteur
de dilution
Cellule de Petroff-Hausser:
Décrivez la décompte des unités viables (mesure directe) - (5)
- Méthode de dilutions en milieu liquide et d’étalement sur gélose
- Méthode des filtres de cellulose
- Résultat significatif entre 30-300 colonies
- Unités Formant des Colonies (UFC)
- Cellules Viables Non Cultivables (VNC)
Décompte des unités viables (mesure directe) - Avantages
les colonies proviennent seulement des cellules vivantes capables de se reproduire
Décompte des unités viables (mesure directe) - Inconvénients
Amas de cellules = 1 colonie
Décompte des unités viables - Méthode des filtres de cellulose
L’échantillon est passé sur un filtre de cellulose dont la porosité retient les micro-organismes
Nommez les mesures indirectes de la mesure de la croissance (2)
- Mesure de l’activité
- Mesure de la masse cellulaire
En mesurant la consommation de substrats (C, N2, O2 ou d’un facteur spécifique de croissance), la concentration des constituants cellulaires (ATP, FAD ou FMN, ADN, protéines) ou l’excrétion de certains produits (CO2 ou NH3), il est possible d’évaluer la concentration microbienne d’un échantillon
Mesure de l’activité, méthode indirecte
Mésure indirecte - Mesure de la masse cellulaire (2)
- Poids sec
- Turbidité par la densité optique - turbidimétrie
Mesure de la masse cellulaire - Poids sec (5)
- Récolte des micro-organismes (filtration sur membrane)
- Lavage + dessiccation (100 à 110oC)
- Pesée (toutes les bactéries, mortes ou vivantes sont pesées)
- Valeurs exprimées en g/L
- Valeurs exprimées en cellules/ml (nécessite un décompte cellulaire avant de récolter les bactéries)
Évaluation de la concentration cellulaire à l’aide de sa densité optique [D.O.] (absorption lumineuse) à une certaine longueur d’onde (Ex 600 nm)
Turbidimétrie
Dans une certaine limite (106/ml < [ ] < 108/ml), la
___ d’une suspension microbienne est directement ___ à sa concentration cellulaire
densité optique, proportionnelle
Pour évaluer la ___ d’une suspension inconnue, on doit préalablement établir à l’aide d’un ___ une courbe de ___ pour des concentrations microbiennes connues
concentration microbienne, spectrophotomètre, référence
Expression mathématique de la croissance bactérienne (3)
- Temps de génération ou de doublement (g)
- Taux de croissance (k)
- Nombre de générations (n) n
Intervalle de temps entre deux divisions cellulaires
successives
Temps de génération ou de doublement (g)
g = t/n (t = Temps, n=nbre de générations)
Temps de génération ou de doublement (g)
Taux de croissance (k)
- Nombre de générations par unité de temps (inverse du temps de génération)
- k = n/t (t = Temps, n=nbre de divisions)
(LogNt – LogNo)/log2
Nt: nombre de cellule au temps t
No: nombre initial de cellule de la population
Nombre de générations (n) n
La culture continue (ouvert) - (4)
- Apport de nutriments
- Élimination des déchets
- La phase de croissance exponentielle est maintenue sur une longue période
- Concentration constante de la biomasse
Il y a 2 types de culture continue
Chémostat et turbidostat
Dans la culture continue, le chémostat ___
Apport constant de nutriments à la même vitesse que le milieu est éliminé
Dans la culture continue, le turbidostat ___
vitesse de dilution déterminée par la densité
Milieux de culture (3)
- Leurs compositions varient à l’infini
- Doivent respecter les exigences nutritives des micro-organismes
- La composition précise d’un milieu de culture dépend de l’espèce à cultiver
Milieu de culture liquide
bouillons de culture (produisent une suspension microbienne)
Même composition que les bouillons, sauf qu’on ajoute de l’agar à1-2% (produisent des colonies microbiennes)
Milieu de culture solide
Polysaccharide extrait d’une algue rouge et utilisé comme agent gélifiant (non métabolisé par les microorganismes)
Agar
Les milieux de culture sont classés selon la composition et selon l’usage (2)
- Comp. : synthétique ou empirique
- Usage : sélectif ou différentiel
Types de milieux de culture synthétiques ou définis
composition chimique entièrement connue
Milieux pauvres permettent la croissance de
seulement certains microorganismes (source de C, N, S, etc…)
Synthétiques ou définis
Types de milieux de culture empiriques ou complexes
composition chimique indéterminée (peptone, extrait de levure)
Milieux riches permettent la croissance d’une grande variété de microorganismes
Empiriques/complexes
Permettent la croissance de la plupart des microorganismes
Milieux de base ou de propagation
Contiennent des composés qui inhibe de façon sélective la croissance de certains microorganismes sans en affecter d’autres.
Milieux sélectifs
La milieu MacConkey contient des sels biliaires et du violet de cristal qui inhibe la croissance des
bactéries ___
Gram+
Contiennent de substances spécifiques permettant de distinguer différentes bactéries par la couleur de leurs colonies
Milieux différentiels
La gélose MacConkey contient du lactose et le rouge neutre (indicateur de pH). La fermentation du lactose acidifie le milieu et produit des colonies rouges.
Exemple de milieu différentiel
Molécules organiques (Glucides, lipides, protéines,
acides nucléiques)
C, H, O, N, P, S
Ions (Cofacteurs d’enzymes)
K, Mg, Ca, Fe