seminario 6 Flashcards
se ha descrito varios alelos de este gen, sólo 2 son predominantes (gustador fuerte y el no gustador). Estos alelos difieren en 3 nt que dan como resultado
el cambio de aminoácidos en la proteína (cambios en el alelo de la población)
DNA doble hebra (así es posible que haya una interacción de puentes de hidrógeno), debe ser amplificada la
doble hebra
para realizar un pcr se necesita
desoxirribonucleótidos Taq polimerasa (no se desnatura con calor)
1° pcr
predesnaturación llevándolo a 100°C
Se instalan partidores para cada hebra que mantienen el
antiparalelismo
Los partidores tienen la misma secuencia de
la hebra opuesta a la que se encuentra instalada
Se pone un exceso de partidores para evitar
que estas se hebras se vuelvan a pegar
La Taq polimerasa comienza a replicar la hebra hasta que
se desnatura luego de 5000 pares de base
la hebra se vuelve a desnaturar y la taq polimerasa volverá
a correr en una cadena mucho más pequeña
Amplificación in vitro
Existe un banco de secuencias para poder localizar la región que se quiere amplificar
Se utilizaron partidores con 24 y 44 bases
Un partidor de 24 bases es suficiente para que se pegue en la región
Control positivo
corroborar que, si no existe el producto deseado, no es por un defecto de reacción (ya que ya tenemos al control que dio positivo)
se utilizan genes housekeeping o constitutivos
Control negativo
comprobar que no exista contaminación en el mix de reacción. se incluyen todos los componentes de la reacción menos el DNA objetivo
Falsos positivos
resulta la banda, pero en realidad no se tiene realmente (como contaminación)
Falso negativo
no resulta la banda, pero la persona si lo presenta
No debería haber diferencias en el tamaño del amplificado, en los 3 casos hay 221 pb
Los partidores amplifican, realizan una copia del DNA flanqueado por los partidores
La diferencia se encontrará en un nucleótido del alelo gustador
Con 50 ciclos
se degradan los reactivos, la enzima se inactiva, etc
20 ciclos
es muy poco para obtener un amplificado
Extremos cohesivos
se corta el DNA, una de las hebras es más corta y la otra es más larga
si a las dos hebras cortadas se adhiere una ligasa
entonces estas secuencias se van a unir
corte romo
ambos fragmentos se cortan y no tienen extremos cohesivos, por lo que es poco probable que se vuelva a unir con ligasa
enzimas de restricción
Son enzimas que cortan el DNA en sitios concretos. Estas secuencias de corte pueden ser de 4, 6 u 8 bases y deben estar organizadas
Este DNA contiene todo el material genético
necesita reducirse para poder identificar la región deseada
A mayor concentración de agarosa
menor será el diámetro del poro y menor será la movilidad. Cuanto mayor sea el fragmento, más se retarda la migración por el gel
endonucleasas de restricción
capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de desoxinucleótidos en el interior de una doble hebra y corta ambas hebras de la doble hélice
