Réplication Flashcards
Qui ont été les premiers à suggéré que l’ADN se réplique?
Watson et Crick
Pourquoi est ce que la réplication est dite semi-conservative
- Les deux cellules filles issues d’une réplication ADN hérite un brin parental d’ADN et un brin nouvellement synthétisé
- Le brin parentaux demeur intacte durant de nombreuses générations cellulaires
Quel exprérience à déterminer que la réplication de l’ADN était semi-conservatrice?
L’expérience de Stahl et Meselson
Explique l’expérience de Stahl et Meselson
- Ajouter du N15 à une double hélice d’ADN
- Effectuer une réplication dans un milieu N14
- Les réplicons auront un brin N15 et un brin N14
- Répété 3 autres fois
- Centrifuger
- Analyser les réactions en utilisant les bandes ADN
Décrit de façon générale le mécanisme de réplication de l’ADN
Les deux brins complémentaires d’ADN sont utilisés comme matrice.
Il y a un appariement complémentaire des bases catalysé par l’ADN polymérase
De quel extrémité de l’ADN (3’ ou 5’) se fait l’allongement durant la réplication?
De l’extrémité 3’
Comment la réplication s’initie t’elle?
Il y a l’ajoute d’un brin amorce (désoxyribonucléotide sous forme monophosphatée) à l’extrémité 3’ d’une chaine de polynucléotides
L’appariement entre le nucléotide ajouté et celui sur le brin matrice facilite l’isertion au bout de la chaîne d’ADN
Qu’est ce qui arrive après l’insertion du brin amorce?
L’ADN polymérase catalyse la réaction (5’–>3’)
Comment la réaction de synthèse d’ADN est elle possible?
Variation d’énergie libre hautement favorable et généré par l’hydrolyse du dNTP (triphosphate) et dNMP (monophosphate)
Quelles sont les deux réactions impliquées dans la synthèse de l’ADN? (formule) Quels sont les délta G des réactions individuelles?
ADN-OH + dNMP –> ADN-dNMP + H2O (+6kcal/mol)
H20 + dNTP –> dNMP + PPi (-8.6kcal/mol)
Quelle est la réaction total finale de la synthèse de l’ADN? Quel est sont délta G?
ADN-OH +dNTP –> ADN-dNMP + PPi (-2.6kcal/mol)
La réaction de réplication de l’ADN est elle réversible?
Non, elle est irréversible
Quel est le mécanisme de l’ajout d’une base à la chaîne d’ADN?
C’est une attaque nucléophilique de la part du O-H 3’ de la chaîne d’ADN sur le premier phosphore de la dNTP
Quels sont les produits de la réaction de l’ajout d’un dNTP à la chaîne d’ADN
Le lien phosphodiester de l’ADN et un pyrophosphate
Pourquoi la réaction d’élongation de la chaîne d’ADN est elle non-réversible?
Le pdt de réaction pyrophosphate va être dégradé par la pyrophosphatase et alors, selon le principe de Le Châtelier, la réaction va se pousser vers les produits
Décrit l’activité de réplication de l’ADN polymérase
- ADN poly. catalyse l’addition par ajout d’un désoxyribonucléotide à l’extrémité 3’-OH d’une chaine polynucléotidique (brin amorce apparié à brin matrice)
- Chaque dNTP doit s’apparier avec le brin matrice pour être recconu par l’ADN polymérase, donc brin matrice détermine quel nucléotide à ajouter
- Rx entrainée par l’énergie générée lors de la libération du pyrophosphate et de son hydrolyse en 2 molécules de Pi
Comment l’ADN polymérase arrive t’elle à catalysée la réaction de réplication de la matrice d’ADN?
En rapprochant les réactifs l’un de l’autre
Qu’est ce que la fourche de réplication?
Région localisée de réplication qui se déplace progressivement le long de la double hélice parentale de l’ADN (structure en Y)
Pourquoi est il impossible d’allonger les deux brins d’ADN dans une fourche de réplication de manière continue?
Il est impossible d’allonger une chaîne dans la direction 3’–>5’
Aucune enzyme catalysant cette réaction n’a été découverte
Décrit le mécanisme à la fourche de réplication
- Les deux brins d’ADN sont orientées de façon opposée et la fourche de réplication se dirige seulement dans une direction
- Le brin de la mauvaise direction est répliqué en utilisant les fragments d’Okazaki
- Donc la fourche de réplication contient un brin précoce (continu) et tardif (discontinu)
Décrit les fragments d’Okazaki
1000-2000 nucléotides pour les procaryotes et 100-200 nucléotides pour les eucaryotes
Petits fragments synthétisés de 5’–>3’ sur le brin tardif, liés ensemble après la réplication de l’ADN
Où se forme la boucle de réplication chez les procaryotes?
À la séquence OriC
Décrit la synthèse des fragments d’Okazaki sur le brin tardif
- Amorces sont des fragments d’ARN d’environ 10 nucléotides de longueur
- Les amorces sont synthétisés par la primase: ARN polymérase
- Les amorces d’ARN sont allongés par l’ADN polymérase pour former des fragments d’okazaki
- Les amorces d’ARN sont dégradés par l’ARNase H et remplacées par de l’ADN
- Les fragments d’okazaki sont liés par l’enzyme ADN ligase (qui nécessite de l’ATP)
Où est situé l’activité d’édition de l’ADN polymérase?
Au site E
Comment fonctionne le site E de l’ADN polymérase?
Activité exonucléolytique de correction 5’–>3’ détache tous les résidus non appariés de l’extrémité 3’ du brin amorce jusqu’à l’obtention de’une base appariée (essai erreur)