Protéines - Cours JPE (Intra) Électrophorèse et prt Flashcards
Discuter de l’élimination des protéines
- Élimination rénale (< 60 kDa)
- Réabsorption et catabolisme
- Prt majeure dans urine = Albumine
- Foie
- Pertes pathologiques (urine, selles, peau, sang)
- Catabolisme cellulaire
Le catabolisme des acides aminés comprend 3 étapes. Lesquelles?
- Transamination
- Désamination (produit NH3)
- Cycle de l’urée
Vrai ou Faux : le sérum contient plus de protéines que le plasma
FAUX
Le plasma en contient plus : Contient le fibrinogène et les protéines de la coagulation
[] prt sérum = 0,96 [] plasma
Quelle est la concentration de protéines totales dans l’organisme?
70 g/L
Quelle est la concentration de ces protéines dans l’organisme?
- Préalbumine
- Albumine
- A1AT
- Alpha-1 glycoprotéine acide
- Haptoglobine
- Alpha-2 macroglobuline
- Transferrine
- Complément (C3/C4)
- Ig (G/A/M)
- Préalbumine : 0,25 g/L
- Albumine : 45 g/L
- A1AT : 1,5 g/L
- Alpha-1 glycoprotéine acide : 0,5 g/L
- Haptoglobine : 1,5 g/L
- Alpha-2 macroglobuline : 3 g/L
- Transferrine : 2,5 g/L
- Complément (C3/C4) : 1,2/0,4 g/L
- Ig (G/A/M) : 12/2/1 g/L
Qu’elle est l’utilité principale de l’électrophorèse des protéines sériques?
Recherche de dysprotéinémies monoclonales
Quelle est la première étape pour l’interprétation d’une électrophorèse des protéines sériques? Quelle est les principale erreur associée?
- S’assurer d’avoir le dosage des protéines totales
- S’assurer que le dosage est juste
- 1ere erreur : tube décongelé et non brassé
Quelle est l’utilité de l’électrophorèse des isoenzymes?
Différencier l’origine tissulaire de certaines isoenzymes
- CK et LD : coeur vs muscle
- PAL : foie vs os
***Nommer 3 méthodes qui permettent la différenciation des isoenzymes de l’ALP et les résultats associés
-
Traitement à la neuraminidase
- Clivage de l’acide sialique terminal de l’ALP hépatique
- Change la charge de l’ALP (ac sialique = négatif)
- négativité : osseuse > hépatique
-
Traitement à la chaleur
- Inactivation de ALP foie, os et intestin
- ALP oncofoetale, foetale et placentaire résistent
-
Ajout d’une lectine
- Lectine lie l’ALP osseuse
- ALP osseuse retardée sur gel (reste à l’anode)
- Permet séparation et quanfitication de ALP hépatique et macrohépatique
- Déduction de ALP osseuse (calcul)
Vrai ou faux : L’ALP macro-hépatique est une macroenzyme
FAUX
Correspond à une ALP exprimée a/n des canules hépatiques
Vrai ou Faux : La formation d’une macroenzyme peut affecter l’activité de l’enzyme
VRAI
Ex : Lipase +++ et Amylase nulle
Perte d’activité de l’amylase (macroenzyme)
Quel est l’algorithme du CHUM pour l’investigation d’un dosage en alpha 1 anti-trypsine?
- Dosage sérique de l’A1AT (néphélé) et CZE-HR
-
Génotypage si
- AAT < 1,15 g/L et CZE-HR normale
- AAT < 2 g/L et CZE-HR inflammatoire
-
Phénotypage si
- Discordance entre dosage et génotypage
Quelle est la méthode utilisée pour le phénotypage de l’A1AT?
Focalisation isoélectrique
Quel est l’avantage du phénotypage de l’A1AT par rapport au génotypage?
Le génotypage investigue seulement 2 variants causant un déficit en A1AT : Variant S et variant Z
- Le phénotypage permet d’observer la présence d’un variant associé à un déficit en A1AT (autre que S ou Z)
- Migration différentielle des variants p/r à A1AT MM
Quel est le prétaitement de l’échantillon associé à une électrophorèse des protéines urinaires?
- Concentration d’une urine 24h de 1 à 100x
- Application de 3-5 µL d’urine concentré
Que devons-nous regarder lors d’une électrophorèse des protéines urinaire pour s’assurer de l’intégrité de l’échantillon?
La présence d’albumine.
- Toujours faire une bandelette urinaire
- Si l’albumine n’est pas visible : erreur manuelle ou interférence
***Discuter des patrons différentiels obtenus en électrophorèse des protéines urinaires en cas de protéinurie glomérulaire (sélective vs non sélective) et tubulaire
- Protéinurie normale : Alb seulement
- Protéinurie glomérulaire : Prt de MW > Alb
- Sélective : quelques prt
- Non-sélective : Plusieurs prt de MW élevé
- Protéinurie tubulaire : Prt MW < Alb
- Chaines légères libres : MW < Alb
**Sens de migration : MW élevé -> Mw faible (Anode -> Cathode)
Discuter de la composition du LCR
- Composition du sérum, mais 200x moins concentré
- B2-transferrine : présence discrète ds LCR vs absente du sérum en condition normale
- 60-80% du glucose sanguin
Quelle est la différence entre la B2-transferrine et la transferrine?
La B2-transferrine ne contient pas d’acides sialiques
Comment le LCR est-il formé?
- Sang artériel filtré par la barrière hématoencéphalique :
- Production du LCR par filtration sélective
- Réabsorption du LCR par les villosités arachnoïdiennes
- Production de sang veineux a/n des sinus
Quel est l’ordre de prélèvement des tubes lors d’une ponction lombaire?
- Hémato :
- Numération cellulaire
- Biochimie
- Protéines et glucose (P/r à éch sanguin)
- Microbiologie :
- Culture et coloration
- Analyse de sédiments
Quelle est l’utilité clinique de l’électrophorèse des protéines du LCR?
- Recherche de bande oligoclonale d’IgG intrathécale
- Toujours faire un sérum en parallèle pour comparer les patrons
- Recherche patron qui est absent du sérum
- Focalisation isoélectrique
- Bandes IgG oligoclonales :
- Sclérose en plaque si > 2 bandes
- Atteinte infectieuse systémique (CMV, HIV, syphillis)
Quel est le test diagnostique d’une fistule de LCR?
- Électrophorèse des protéines pour échantillon sanguin et liquide d’écoulement (nasal/oreille)
- Agarose ou capillaire
- Présence de B2-transferrine dans le liquide d’écoulement Dx pour une fistule
Quels sont les biomarqueurs associés à un Dx d’alzheimer?
- Neurofilaments ↑
- Amyloïde ↓ (précipite pour former plaques)
- Tau ↑
Vrai ou faux : L’albumine est une glycoprotéine
FAUX
Nommer des conditions qui sont associées à une augmentaiton de la perméabilité vasculaire
- Choc septique
- Trauma
- Syndrome de détresse respiratoire
- Brulure
- Angio-oedème
Vrai ou faux : L’hyperalbuminémie est associé à une cause pathologique
FAUX
Déshydratation. HyperAlb transitoire (hémoconcentration)
Nommer des causes d’hypoalbuminémie
- Analbuminémie congénitale
- Maladie inflammatoire
- Malabsorption
- dénutrition
- Pertes rénales (atteinte glomérulaire)
- Pertes GI
- maladie inflammatoire
- Hémorragie digestive
- Diarrhée profuse
- Perte par la peau
- Redistribution corporelle pathologique
- oedème, ascite
- Compensation pour augmentation de la pression oncotique
Nommer 3 méthodes de dosage de l’albumine
- Néphélémétrie
- Bromocrésol vert ou pourpre
- Électrophorèse
Quelles sont les 2 fonctions de la céruloplasmine?
- Activité ferroxydase
- Oxydation de Fe2+ → Fe3+
- Transport du Cu
Compléter la phrase :
L’haptoglobine a une activité __________ puisqu’elle lie d’Hb libre et previent l’utilisation du ____________ par les ___________
L’haptoglobine a une activité bactériostatique puisqu’elle lie d’Hb libre et previent l’utilisation du fer par les bactéries
Qu’est-ce que l’hémopexine?
Protéine de phase aigue positive qui prévient la perte de fer en captant l’hème libérée
Quelle est l’utilité clinique principale de la transthyrérine?
- Évaluation du statut nutritionnel
- t1/2 = 2 jours (reflet changement rapide)
***Nommer des facteurs non-spécifiques au statut nutritionnel qui modifient la concentration sanguine de la transthyrétine
Augmentation :
- Maladie rénale chronique
- Néphropathie diabétique
- Tx à l’aspirine
Diminution :
- Dénutrition
- Maladie hépatique
- Inflammation aiguë
***Discuter de l’absorption du fer a/n intestinal
- Transporteur DMT1 a/n apical
- Transport du fer ferreux à l’intérieur de la cellule intestinale (entérocyte)
- Ferroportine a/n basolatéral
- Transport du fer ferreux vers la circulation
- Fer ferreux oxydé en Fe3+ puis transporté par transferrine
- Hephaestine, Céruloplasmine
- Hepcidine :
- Rétrorégule l’expression des Ferroportine et DMT1 lorsque les réserves de fer sont adéquates
**Absorption intestinale facilitée par : Alcool, Vit C, fructose, absorption antagonisée par calcium
Vrai ou faux : La transferrine est un bon marqueur nutritionnel
VRAI
t1/2 7-8 jours, influencée par statut nutritionnel
***Discuter de la régulation de la synthèse de la transferrine
- Réactant de phase aiguë NÉGATIF
- Synthèse régulée par la biodisponibilité du fer
- Fer ↑ : transferrine ↓
- Fer ↓ : transferrine ↑
Quelle est l’utilité clinique de la mesure de la saturation de la transferrine?
Saturation associée à différentes pathologies selon si elle est faible ou élevée
-
Saturation élevée : surcharge en fer
- Hémochromatose
- surcharge en fer
- Anémie (hémolytique)
- Polytransfusion
-
Saturation basse : Déficit en fer
- Anémie ferriprive
- Grossesse
- Perte en fer
- Inflammation
- Infection
Quelle est l’utilité clinique du dosage de la ferritine?
Indiqué pour détecter une carence en fer (plutôt que le fer)
Compléter la phrase :
La ________ est l reflet des réserves corporelles en fer
La ferritine est l reflet des réserves corporelles en fer
Comment la saturation de la transferrine peut-elle être estimée (pas un dosage quantitatif)?
Par CZE-HR:
- Saturation : augmentation de la bosse juste avant Tf
***Décrire la concentration des marqueurs de l’homéostasie du fer en cas de :
- anémie ferriprive
- Hémochromatose
- Anémie hypoproliférative
Anémie ferriprive :
- Transferrine : ↑
- Fer, ferritine, Sat Tf : ↓
Hémochromatose :
- Fer, Sat Tf, ferritine : ↑
- Transferrine : ↓
Anémie hypoproliférative :
- Fer, transferrine, ferritine : ↓
- Sat Tf : +/- normale
Nommer des causes d’hypotransferrinémie
- Inflamamtion
- Maladie hépatique chronique
- Malnutrition
- Pertes protéiques (syndrome néphrotique)
- Atransférrinémie congénitale
*** Dans un électrophorèse des protéines sériques, quelles protéines seront augmentées et quelles seront diminuées en contexte d’inflammation aiguë
Augmentée :
- A1AT
- Haptoglobine
- Complément
- CRP
- AAG
Diminuée :
- Albumine
- Transferrine
- Transthyrétine
- RBP
***Nommer différents types d’électrophorèse et leur principe de séparation (taille, charge pI)
- Acétate de cellulose : charge
- Agarose : charge
- PAGE : Taille et charge
- SDS-PAGE : taille
- CZE : Charge
- Focalisation isoélectrique : pI
Quel est le principe de l’électrophorèse de zone?
- Tampon à pH élevé : Tampon barbital pH 8,6
- Les protéines sériques sont majoritairement chargées négativement
- Charge globale négative différente
- Migration des protéines à des vitesses différentes
- Les ions du tampon sont impliquée dans l’établissement du pH et du transport du courant électrique
Comment la force ionique influence-t-elle la migration électrophorétique?
- Augmentation de la force ionique = masque la macromolécule face au champ électrique
- Augmente la résolution
- Diminue la vitesse de migration
- Produit de la chaleur
- Refroidissement du système nécessaire
**Force ionique mise à profit en CZE-HR
Quelles sont les 2 équations de la migration électrophorétique ?
µ = l*d / (t*V)
vitesse migration (l/t) / force du champ électrique (V/d)
- l = distance parcourue
- d = longueur du gel
- t = temps d’électrophorèse
- V = voltage du système
Unités : cm2/Vs
µ = Q /6 πnr
- Q = Charge nette de la molécule
- n = viscosité du milieu
- r = rayon ionique de la molécule
Compléter la phrase :
Les électrophorèses sont généralement effectuées à _________ constant, mais en clinique on les fait à __________ constant
Les électrophorèses sont généralement effectuées à intensité constant, mais en clinique on les fait à voltage constant
***Expliquer le principe de l’électroendo-osmose
Seul mode électrophorétique où les molécules migrent de l’anode vers la cathode
- à pH basique (8,6 tampon barbital), le support solide contient des silanols libres déprotonés (O-)
- Il se forme 3 couches ioniques différentes :
- Une couche ionique positive STATIQUE à la surface du support solide
- Stern Layer
- Une couche de diffusion où il y a plus de cations que d’anions
- Une couche mobile ou les cations = anions
- Une couche ionique positive STATIQUE à la surface du support solide
- Les couches statique et de diffusion étant davantage composées d’ions positifs, les anions dans la couche mobile seront davantage retenus que les cations
- Crée un fort mouvement de solution (cation) vers la cathode (en sens contraire du champ électrique)
Quest-ce que l’électrophorèse capillaire?
Combinaison de la chromatographie et de l’électrophorèse
Quelles sont les limites de la chromatographie et de l’électrophorèse sur gel pour l’investigation des protéines?
Chromatographie :
- RÉsolution pas optimale
- Absorption de protéines
- Dénaturation de protéines
Électrophorèse sur gel :
- Temps d’exécution important
- coloration nécessaire (semi-quantitaitf)
- +/- Répétabilité
Quels sont les avantages de l’électrophorèse capillaire p/r à la chromatographie et l’électrophorèse sur gel?
- Automatisé
- Détection en cours d’analyse (détecteur UV)
- Quantitatif
- Reproductibilité de séparation
Quels tests réflexes sont pertinents à faire suite à une électrophorèse capillaire (le cas échéant)?
- Dosage de la Tf, saturation Tf, fer
- SI estimation
***Nommer des bénéfices cliniques additionnels propres à la CZE-HR
- États cliniques mixtes plus facile à investiguer
- Capacité de détection d’un faible pic monoclonal
- Permet distinction d’un patron oligoclonal
- Déficience en AAT : Meilleure exactitude clinique
- Migration différentielle des variants potentiellement observable
- Reconnaissance de conditions qui peuvent influencer [] AAT
- quantification possible
- Permet de différencier hémolyse in vivo de in vitro
- Complexe Hb-Hapto observable (bosse avant alpha2-macro)
- Meilleure exactitude pour ID syndrome néphrotique
- ↑ modérée alpha2 macro
- Permet d’estimer quantitativement la transferrine
- Saturation de la transferrine visible
- Permet l’étude du complément
- C3 instable -> C3d
- ↓ C3 avec ↑ C3d = complément dégradé
- ↓ C3 sans ↑ C3d = pas d’↑ du complément
***Nommer des caractéristiques exploitables de la CZE-HR
- Automatisé
- Grande quantité d’info sur plusieurs prt spécifiques
- Grand nbre d’état clinique percevables, identifiables ou confirmé
- Résolution accrue
- Sensibilité accrue
- Exploitation hors gammapathie
- Anémie ferriprive
- Anémie chronique, surcharge en fer
- Hémolyse intravasculaire
Nommer des interférences possibles en CZE-HR
- En alpha 1 : Agent de contrastre et lipémie
- En bêta-gamma : CRP et fibrinogène
Distinguer un syndrome néphrotique d’une inflammation aiguë (patron d’électrophorèse: bandes alb, a1, a2, b, gamma)
Syndrome néphrotique
- Albumine : ↓
- Alpha 1 : N
- Alpha 2 : ↑ (alpha2 macro ↑, remplace Alb)
- bêta : ↑
- Gamma : ↓
Inflammation aiguë :
- Albumine : ↓
- Alpha 1 : ↑
- Alpha 2 : ↑
- bêta : N-↑
- Gamma : N
