Praktikum

Question 1

Wozu dient eine Eichkurve?

Answer 1

• durch das Lambert-Beer’sche Gesetzt kann man über die Extinktion bei einer bestimmten Wellenlänge Rückschluss auf die Konzentration eines Stoffes ziehen, sofern der molare Extinktionskoeffizient bekannt ist
• ist dieser nicht belannt, kann er mittels mehrerer Proben bekannter Konzentration ermittelt werden

Question 2

Wie stellt man einen Puffer her?

Answer 2

• schwache Säure und Base benötigt
• deren Konzentration muss bestimmt werden
• mittels pH Wert gleichung kann das Verhältnis berechnet werden
• dann in Gleichung V_ges = V_A + V_B einsetzten
  
  • → 10ml = 2V_A + V_A

Question 3

Wie funktioniert die Größenausschlusschromatographie?

(Gelfiltration)

Answer 3

• Säule mit stationärer Phase aus Gel mit bestimmter Porengröße
• Pufferstrom fließt durch Gel
• Proteingemisch wird dazugegeben
  
  • kleine Proteine welche ungefähr der Porengröße entsprechen fließen langsamer durch das Gel, da sie in die Proen rutschen
  • größere Proteine passen nicht in die Poren und strömen durch das Gel

Question 4

Wie funktioniert der Bradfort Test

Answer 4

• Farbstoff G250 wird zu Protein gegeben, dieser binded an basische Seitenketten, dadurch Verschiebung des Extinktionsmaximus
• gebundene G250 Moleküle und damit Extinktion sind propotional zur Konzentration des Stoffes
• bei bekanntem Extinktionskoeffizienten direkter Rückschluss auf Konzentration möglich
  
  • ansonsten erstellen einer Eichkurve mittels bekannter Konzentrationen

Question 5

Wie funktioniert die Ammoniumsulfat Fällung?

Answer 5

• Ammoniumsulfat dehydratisiert Proteine
  
  • Hydrathülle der Proteine geht aus Ammoniumsulfat
• Protein fällt aus (Hydrophober Effekt, nicht mehr in Lösung)