PAL (Hématologie) Flashcards
Où se trouve la phosphatase alcaline:
Dans les granulations spécifiques des stabs et neutrophiles matures.
Quel est la technique PAL:
Une réaction cyto-enzymatique en utilisant des substitues de naphtols et des sels de diazonium.
Principe de PAL:
- les phosphatases alcalines libèrent du napthol à partir d’un substrat (naphtol AS-BI phsophate
- le napthol libéré se joint à un sel de diazonium (solution FRV-alkaline) et forme un précipité brun
La réaction PAL est maximale à quel pH:
9.5
L’intensité du précipité est proportionnelle à:
L’activité enzymatique dans chaque granulocyte neutrophile.
Le pointage du PAL est déterminé par:
Comptage de 100 granulocytes neutrophiles ou stabs consécutifs. Chaque cellule comptée est marquée d’un pointage dépandant de son degré de positivité.
Quels sont les fixatifs utilisés:
- 25 ml de solution citrate (acide citritque + citrate de sodium)
- 65 ml d’acétone
- 8 ml de formaldéhyde à 37%
Entreposage du fixatif:
Au fridge, stable pendant 4 semaines. Amener entre 18-26oC avant l’utilisation.
Quels sont les réactifs:
- fixatif
- solution naphtol AS-BI alkaline (pH 9.5)
- solution FRV-alkaline (fast red violet LB base)
- solution nitrite de sodium
- solution hematoxylin, Gill no3
Sang utilisé:
Sang prélevé sur héparine
Préparation du frottis:
- Le frottis doit être coloré pour l’activité enzymatique en dedans de 8 heures après le prélèvement
- sinon, fixation et entreposage dans le congélateur
- le frottis soit être sécher au moins 1 heure avant la fixation et 3 heures post fixation avant de les placer dans le congélateur
Contrôle de qualité:
- positif: femme enceinte dans le dernier trimestre de la grossesse ou quelques jours post-partum
- négatif: imerger un frottis dans l’eau bouillante pendant 1 minute afin d’inactiver l’enzyme
Ils peuvent être préservés pendant 1 année lorsqu’ils sont entreposés dans du parafilm à -70oC
Quels sont les causes d’erreurs:
- Une basse température diminue le pointage PAL
- une tempréature plus que 30oC augmente l’activité de la phosphatase alcaline
- les contraceptifs oraux, le cortisol et le stress peut augmenter les résultats
Le PAL est augmenté dans les conditions suivantes:
- infections
- maladie de Hodgkin
- myélome multiple
- réactions leucémoides
- myélofibrose
- polyglobulie absolue primitive
- traitements par les corticostéroides
- troisième trimestre de la grossesse
Le PAL est diminué et parfois nul dans les conditions suivantes:
- leucémie myéloide chronique
- hémoglobinurie paroxystique nocturne
Sites pour ponctions de la moelle osseuse:
- crête iliaque postérieure
- sternum
- crête iliaque antérieure
- vertèbres de la colonne vertébrale
Tube Wintrobe:
- cellules adipeuses et périvasculaires (2%)
- plasma
- buffy coat composé de cellules méloide: érythroide (5%)
- globules rouges
Quel est le principe du colorant Wright/Giemsa:
Coloration panoptique composée de colorants de Ramanowsky. La combinaison d’éosine et de dérivé oxydé du bleu de méthylène (Wright`s - azure A, azure B, azure C, violet de méthylène) et (Giemsa - azure II)
Principe de l’éosine:
Colorant d’aniline acide qui forme un sel avec les éléments basiques des cellules, tels le cytoplasme, l’hémoglobine et quelques protéines et colore en rouge-orangé.
Principe des dérivés basiques du bleu de méthylène:
Ils se combinent avec les constituants acides de la cellule telle que l’ARN cytoplasmique et le matériel nucléaire, tel l’ADN et les colorent en bleu-violet.
Wright/Giemsa contient:
- 4.5g colorant Wright
- 1000 mL de méthanol absolue (sans acétone)
- 0.1g Giemsa
Principe de la coloration au Bleu de Prusse:
- en présence d’une solution acide de ferrocyanure de potassium, le fer ionique des cellules est converti en ferrocyanure ferrique qui se colore en bleu-vert ou bleu noir
La coloration au Bleu de Prusse est utilisée pour:
- Identifier les sidéroblastes, sidérocytes et le fer dans les cellules réticulo-endothéliales.
- Estimation du fer de réserve dans le matériel périvasculaire (riche en macrophages)
Quel sont les réactifs au Bleu de Prusse:
- 2% ferrocyanure de pottasium
- 0.5% HCl
- 10% formol (fixateur)
