Moelle Osseuse (Hématologie) Flashcards
Quels sont les trois raisons pour raire une ponction de moelle:
- pour aider au diagnostic quand les autres tests sont insuffisants
- pour surveiller l’évolution de la maladie
- pour vérifier si le traitement est efficace
Qu’est ce qu’on fait avant de faire les tests de moelle:
- examen physique
- formule sanguine complète
La ponction de moelle est indiquée pour:
- leucémies
- lymphomes
- n’importe quelle anomalie trouvée dans le sang qui ne peut être identifié avec les habituels
La ponction de moelle peut être fait mais avec précautions:
- patient avec thrombopénie
- patient avec un déficit en facteur (plus de 50% activité nécessaire)
- prise d’anticoagulants
Points de prélèvement pour l’adulte:
- crête iliaque postérieure (ponction et biopsie)
- sternum (ponction)
Point de prélèvement pour un jeune enfant:
Plateau tibial (ponction)
Le plateau stérile devrait contenir:
- différentes seringues et aiguilles
- anesthésile locale (lidocaine ou xylocaine)
- antiseptique (providione, alcool)
- compresse de gaz stérile, pansements stériles, champs stériles troués
- Trocart
Chariot de laboratoire devrait contenir:
- lames et lamelles
- tubes à essai avec anticoagulants
- boites de pétries et pipettes pasteurs
- gants
- nécessaires pour cultures si nécessaire
- crayon
Rôle du technologiste:
- s’assure du bon prélèvement, richesse du spécimen
- s’assure que le spécimen est placé dans les bons tubes de prélèvement, selon les tests à effectuer
- prépare les frottis
Cellularité de la moelle (richesse) est fait à partir de quel spécimen:
La biopsie
Myélogramme:
faible grossissement:
- richesse
- voir les grosses cellules (mégacaryocytes), amas de cellules, ilots érythroblastiques
Immersion
- décompte 2 lames de 200
p.5
:D
La biopsie de moelle est utilisé pour étudier:
- proportion des cellules hématopoiétiques (richesse)
- aspect des cellules hématopoiétiques
- tissus de soutient de la moelle (vaisseaux, réticuline…)
- trouver des cellules ou ilots métastatiques plus facilement
Matériel utilisé pour la biopsie de moelle:
Fixateur pour la carotte, avant B-5, maintenant Zenker, formaline
Technique de la biopsie de moelle:
- déposer la carotte sur un gauze
- toucher à trois ou quatres endroits sans frotter
- coloration Wright-Giemsa (deux fois à la machine ou plus longtemps manuellement)
- décalcification
- enrobage à la paraffine
- coupes
- colorations à paritr de la carotte
On cherche quels maladies à partir de la biopsie de moelle:
- hémopathie maligne
- myélofibrose
- cancer propagé à la moelle
- lymphome
- granulomatose
Rapport M:E
Myéloide:érythroide
Myéloide:
Lignée granulocytaire sauf éosino et baso
Érythroide:
Cellules nucléées de la lignée érythrocytaire
Rapport M:E normal:
4:1
Le rapport M:E est diminué si:
GR augmente
GB diminue
Quel est le but de faire les colorations spéciales:
Identifier des leucémies et des cellules jeunes.
Quels sont les étapes de la coloration:
- fixation:
- réaction
- contre-coloration
- interprétation
Fixation:
Permet de fixer les éléments sur la lame et d’assurer qu’ils ne seront pas modifiés pendant la coloration. La fixation doit être délicate.
Réaction:
Dépendant du colorant utilisé, cette première coloration va mettre en évidence une certaine composante de la cellule par réaction cytochimique ou enzymatique.
Contre-coloration:
Permet de colorer les éléments non recherchés d’une couleur contrase à la réaction initiale et de faible intensité (pour éviter de masquer la réaction), ce qui facilite l’interprétation de la lame.
Interprétation:
Interprétation des lames par la combinaison des différentes colorations selon les paramètres recherchés, fait par un pathologiste.
Quels sont les deux types de réactions possibles dans une coloration spéciale:
Cyto-enzymologique
Cytochimique
Réaction enzymatique:
Réaction chimique qui est catalysée par un complexe enzyme-substrat
Réaction non enzymatique:
Basé sur les propriétés chimiques des éléments qu’on veut observer.
Quel est le but de la myéloperoxydase:
La myéloperoxydase est une enzyme lysosomiale localisée dans les granulations primaires (azurophiles) et secondaires des granulocytes neutrophiles (donc à partir du promyélocyte), des granulocytes éosinophiles et dans les granulations azurophiles des monocytes.
Quel est l’utilité de la myéloperoxydase:
Cette coloration permet de distinguer les leucémies myéloblastiques et myélomonoblastiques de la leucémie lymphoblastique aigue.
Les granules primaires sont absentes dans les
myéloblastes, mais une activité limitée (faible) de la
myéloperoxydase est démontrée aux futurs sites des
granules primaires. Cette activité sera donc utile
dans la différentiation des myéloblastes ou
myélomonoblastes des lymphoblastes.
Quels sont les résultats de la myéloperoxydase:
Cellules de la lignée myéloide…………………….Forte réaction positive en gros amas
Myéloblastes………………………………………………….Réaction faible ou négative
Monocytes……………………………………………………..Réaction positives en grains très fins
Myélomonoblastes………………………………………..Réaction faible ou négative
Cellules de la lignée lymphoides
et tout les autres cellules……………………………..Réaction négative
Les corps d’Auer (fusion de granules primaires), présents surtout dans la leucémie myéloblastique, sont positifs
Quel est le but du Noir Soudan B
Le noir Soudan B est un colorant lipophile nommé lysochrome. Celui-ci se lie irréversiblement aux phospholipides intracellulaires des granulations azurophiles des granulocytes neutrophiles, éosinophiles et certains monocytes.
L’intensité et la grossièreté de la coloration
augmente avec les stades de maturation
myélocytaire.
Quel est l’utilité du Noir Soudan B:
La réaction est très semblable à celle de la myéloperoxydase et permet également de distinguer les leucémies myéloblastiques et myélomonoblastiques de la leucémie lymphoblastique
Quels sont les résultats obtenus avec le noir Soudan B:
Cellules de la lignée myéloide……………………………………..Réaction positive croissante
Myéloblastes plus mature……………………………………………..Réaction faible
Jeune myéloblaste…………………………………………………………Réaction négative
Granulocytes éosinophiles……………………………………………Réaction variable positive
Monocytes et leurs précurseurs…………………………………..Réaction légèrement
positives (fines granulations
dispersées, diffuses)
Lignée lymphoide, érythroide, mégacaryocytaire……..réaction négative
Les corps d’Auer (fusion de granules primaires), présents surtout dans la leucémie myéloblastique, sont positifs
Quels sont les différents types d’estérases:
Estérases
Isoenzymes
Présents dans
Substrats
Estérases spécifiques: chloroacétate
1,2,7,8,9
Granulocytes neutrophils
Naphtol-AS-D-chloroacétate
Estérases non spécifiques: α-naphtyl estérases
3,4,5,6
Monocytes, mégacaryocytes et plasmocytes
α-naphtyl acetate ou α-naphtyl butyrate
Quel est l’utilité des esétrases:
Les réactions cyto-enzymologiques des estérases sont utilisées pour différencier les cellules de la lignée monocytaire des cellules de la lignée granulocytaire.
Les estérases non spécifiques sont inhibées par le fluorure de sodium (NaF). Celui-ci aide à confirmer la nature monocytaire des cellules.
Quel est le but des estérases:
Les estérases hydrolysent le substrat et libèrent des composés du naphtol qui se lient avec un sel diazonium (pararasaniline) et forment des précipités fortement colorés aux endroits où se fait l’activité enzymatique.
Quel est la réaction des estérases
Subtrat
estérase
Napthol libéré
sel de diazonium
Granulations rouges ou bleues
Quels sont les résultats obtenues avec les estérases spécifiques:
Naphtol-AS-D-chloroacétate esterase spécifique
Promyélocytes, myélocytes, métamyélocytes
Réaction positive
Stabs et granulocytes neutrophils
Réaction positive
Myéloblastes
Réaction variable
Monoblastes, promonocytes, monocytes
Réaction faible ou négative
Quels sont les résusltats obtenues avec les estérases non spécifiques:
α-naphtol estérases
Monocytes
Reaction positive
Histiocytes
Reaction positive
Lignée granulocytaire
Réaction faible ou negative
Mégacaryocytes et plaquettes
Reaction positive
α-naphtol estérases avec NaF
Monocytes
Réaction negative (inhibé par NaF)
Histiocytes
Reaction positive (résistance au NaF)
Lignée granulocytaire
Reaction faible inchangée (résistance au NaF)
Quel est le but de la phosphatase acide (avec résistance à l’acide tartrique):
La phosphatase acide est présente dans les lysosomes de toutes les cellules hématopoïétiques. Cependant, lorsqu’elle est présente dans les tricholeucocytes de la tricholeucémie elle est résistante à l’acide tartrique contrairement aux autres cellules hématopoïétiques.
Quel est l’utilité de la phsophatase acide:
Cette réaction permet donc de confirmer la présence des tricholeucocytes.
Quels sont les résultats obtenus avec la phosphotase acide:
Tricholeucocytes de la tricholeucémie
Réaction modérément ou fortement positive (non inhibé par l’addition de l’acide tartrique)
Plaquettes et plasmocytes
Reaction positive intense
Inhibé par l’addition de l’acide tartrique
Monocytes
Reaction modérément positive
Inhibé par l’addition de l’acide tartrique
Granulocytes et ses précurseurs, lymphocytes et erythroblasts
Reaction faible ou negative
Inhibé par l’addition de l’acide tartrique
Leucémie lymphoblastique à cellules T
Reaction modérément ou fortement positive
Inhibé par l’addition de l’acide tartrique
Quel est le but de TdT (désoxynucléotidyl-transférase terminale)
La TdT est reconnue comme un marqueur des cellules lymphocytaires jeunes (lymphoblastes). C’est une enzyme observée dans les cellules pré-B et les lymphoblastes T et dans quelques cellules de la moelle normale. Mais est absente dans les lymphocytes B.
La TdT est classifiée comme une ADN polymérase présente dans les cellules lymphocytaires.
La TdT est mise en évidence par l’intermédiaire des anticorps monoclonaux utilisant des méthodes d’immunofluorescence, immuno-enzymatiques ou d’immunoperoxydase.
Quel est le résultat de TdT
Est donc utilisée pour différencier une LLA (leucémie lymphoblastique aigue d’une ) d’une LMA (leucémie myéloblastique aigue).
Cette technique est utile à la détection de seulement un petit nombre de cellules TdT +, par exemple dans le LCR
Quels sont les résultats de TdT:
Son activité est augmenté dans 90% des leucémies lymphoblastique aiguës (5% des sujets atteints d’une leucémie myéloblastique démontrent également une réaction positive au TdT.)
Quel est le but de PAS (acide périodique-réactif de Schiff)
La réaction au PAS permet de mettre en évidence le glycogène intracellulaire de même que les polysaccharides, les mucopolysaccharides, les glycoprotéines et les mucoprotéines.
Le glycogène est présent dans le cytoplasme des granulocytes, les monocytes et des lymphocytes.
Puisque plusieurs lignées cellulaires réagissent positivement au PAS, on doit évaluer le motif et l’intensité de la coloration pour différencier les différentes lignées cellulaires.
Quel est l’utilité du PAS:
La réaction au PAS ne permet pas de distinguer les leucémies myéloblastiques aiguës des leucémies lymphoblastiques aiguës. Cependant, elle permet de confirmer le diagnostic d’érythroleucémie (M6) car, au cours des érythroleucémies, elle est positive dans les érythroblastes à tous les stades de maturation tandis que, dans les érythroblastes normaux, la réaction au PAS est négative.
Quels sont les résultats obtenus avec le PAS
Cellules de la lignée myéloide
(sauf les myéloblastes)…………………………………………………réaction modérée ou forte,
croissante du promyélocyte
au granulocyte segmenté
Granulocytes éosinophiles et basophiles…………………Les granulations spécifiques
sont négatives; le cytoplasm
peut contenir des fines
granulations légèrement
positives
Lymphocytes………………………………………………………………Réaction positive moins forte
que celle des granulocytes,
mais les grains sont plus gros
Monocytes…………………………………………………………………Petits grains dispersés
Lymphoblastes leucémiques…………………………………..de 30-40% des cellules
montrent de grosses granulations
Leucémie lymphoide chronique…………………………….. forte positivité en grains ou
en plages
Lignée érythrocytaire nomrale…………………………………. réaction négative
érythrocytes dans l’érythroleucémie………………………..réaction positive modérée
ou forte
Quel est le but de PAL (phosphatase alcaline leucocytaire)
Mettre en évidence la phosphatase alcaline qui est dans les granulations spécifiques des granuleux neutrophiles à partir du myélocyte.
Quel est l’utilité de PAL
Différencier une leucémie myéloide chronique d’une réaction leucémoide ou d’un autre syndrome myéloprolifératif.
Comment?
Dans la leucémie myéloide chronique, cette réaction est négative.
Quels sont les résultats de PAL
0: négative pas de précipité ou coloration
1: quelques granulations positives, coloration diffuse
2: nombre modéré de granulations, coloration diffuse
3: nombreuses granulations, coloration fortement positive
4: très nombreuses granulations agglutinées, coloration très fortement positive
