Microscopie électronique - AG Flashcards
Quelle est l’utilité générale d’un microscope électronique?
observer l’ultrastructure cellulaire avec une meilleure magnification et résolution
Nommer les deux types de microscope électronique.
Lequel utilise-t’on dans les laboratoires de pathologie?
Microscope à transmission: utilisé en pathologie
Microscope à balayage
Comment est formée l’image dans un microscope électronique à balayage?
Quel genre d’image obtient-on?
Formation d’image:
Le faisceau d’électrons scanne la surface du tissu
Ce sont les électrons secondaires qui sont émis à partir du spécimen qui seront détectés par un senseur.
Image:
Image de la surface externe du tissu
Quel type de microscope permet d’obtenir l’image ci-dessous (transmission ou balayage)?
Balayage
Comment se nomme cette coloration?
À quoi sert-elle?
Bleu de toluidine
Cibler la zone d’intérêt par le pathologiste sur le bloc pour le retailler dans le but de faire les coupes fines finales.
Avec quel type de microscope est obtenue l’image ci-dessous?
Transmission
Nommer deux domaines de la pathologie où la microscopie électronique demeure essentielle en 2021?
Pathologie rénale
Pathologie musculaire
Qu’est-ce que la résolution d’un microscope?
Capacité de discerner deux objets rapprochés comme étant distincts
Pourquoi le microscope électronique a une meilleure résolution qu’un microscope optique?
parce qu’il tire avantage de la très courte longueur d’onde des électrons
Comment sont faites les lentilles dans un microscope électronique?
Les lentilles de verre de la microscopie optique sont remplacées par des lentilles magnétiques constituées de bobines de fil de cuivre dans une enveloppe de fer.
Lorsque le courant passe dans la bobine, il y a création d’un champ magnétique proportionnel à la force de courant, faisant dévier les électrons de manière à les centrer sur le spécimen.
Comment est créée l’image dans un microscope à transmission?
Par le passage des électrons au travers du spécimen.
Les zones du tissu denses aux électrons (qui se sont liées aux métaux lourds) auront fait dévier le faisceau d’électrons et apparaîtront noires.
Les zones du tissu qui auront été traversées par les électrons qui apparaîtront blanches.
Quel est le fixateur préféré en microscopie électronique?
Glutaraldéhyde 4%
Pourquoi doit-on mettre de petits fragments milimétriques dans le glutaraldéhyde?
La vitesse de pénétration du glutaraldéhyde dans le tissu est plus lente que celle du formaldéhyde et il faut éviter l’autolyse au centre du fragment.
Les petites pièces permettent aussi une meilleure imprégnation et inclusion du tissu.
Est-il possible d’utiliser du matériel fixé au formol?
Si oui, quel est l’impact sur l’image finale?
Oui, mais on doit refixer dans le formaldéhyde
présence de nombreux artéfacts qui ne peuvent être éliminés
Quel est le rôle de la post-fixation au tétroxyde d’osmium?
Sert à préserver les lipides, particulièrement les phospholipides.
Rôle majeur dans la déflexion des électrons et la création des images.
Nommer les étapes de préparation d’un spécimen pour la microscopie électronique
Combien de glomérules sont suffisant pour l’examen en microscopie électronique en pathologie rénale?
un glomérule est généralement suffisant puisque les lésions recherchées atteignent tous les glomérules
Quel est le rôle de la coloration aux métaux lourds?
rôle crucial dans la dispersion des électrons :
Les zones colorées aux métaux lourds ne seront pas traversées par les électrons et apparaitront noires sur l’image
Peut-on utiliser du matériel paraffiné pour l’examen au microscope électronique?
Oui, mais il y aura d’avantage d’artéfacts
Nommer deux techniques spéciales qu’il est possible d’utiliser en microscopie électronique et leur rôle.
Coloration négative: analyser des particules virales en suspension dans de l’eau distillée et faire un diagnostic d’infection virale rapide.
Immunomarquage: Permet la localisation d’un antigène sur un site cellulaire particulier
Vous soupçonnez une inversion de spécimens lorsque vous regardez vos images de microscopie électronique. Nommer les éléments pré-analytiques à considérer.
Regarder l’identification du spécimen : erreurs sur la requête
- nom du patient
- RAMQ
- nom du médecin
- date de prélèvement
- Présence de renseignements cliniques.
Appeler le clinicien et discuter d’une inversion possible lors du prélèvement
La qualité des images obtenues est mauvaise. Nommer les éléments de l’étape analytique à considérer.
Composante technique à considérer surtout :
- Macroscopie : Échantillonnage adéquat.
- Fixation adéquate : durée et bon type de fixateur.
- Post-fixation.
- Circulation, inclusion, coupe (épaisseur).
- Coloration adéquate.
- Fonctionnement adéquat du microscope électronique.
Un spécimen envoyé pour la microscopie électronique a été perdu. Nommer les éléments de la phase analytique à considérer.
Composante technique :
- Macroscopie : identification du patient, cas reçus dans la journée, vérifier les poubelles, les instruments, les pots.
- Perte lors de la circulation, inclusion, coupe.
- Perte de la grille.
Durant la phase analytique, des erreurs d’interprétation peuvent survenir. Qu’est-ce qu’un faux positif et nommer un exemple.
Faux positif : interprétation de structures normales comme étant significatives.
Exemple: publication récente ayant mépris une structure normale (vésicules recouvertes de clathrines, organelles normales impliquées dans le transport intracellulaire) comme une preuve de la présence du SRAS-CoV-2 dans le tissu rénal.
Comment un faux négatif pourrait-il survenir?
faible quantité de structures caractéristiques dans le spécimen et elles sont absentes sur la zone examinée
Quelle étape spécifique à la microscopie électronique est fortement susceptible d’une inversion de spécimen ?
Comment détecter ces erreurs?
Lors du dépôt des coupes sur les grilles parce qu’on ne peut pas identifier la grille elle-même.
Corrélation avec les renseignements cliniques, les laboratoires et les trouvailles histologiques en microscopie optique et en immunofluorescence
Combien de temps (selon le CAP) doit-on garder les blocs de résine?
10 ans
À vie à HDQ
Quel est le turn-around time acceptable selon le CAP pour la ME?
Ajoute un délai de 2-3 jours au délai de 3 jours acceptable pour les biopsies.
