Métodos de estudio Flashcards
1
Q
en qué consiste la centrifugación y cuales son sus tipos
A
- Usa la fuerza centrífuga para separar los componentes de una sustancia
- centrifugación diferencial: ir centrifugando a distintas velocidades, a velocidades más lentas caen cosas + pesadas. separa c/componente de las célula del preparado.
- centrifugación isopícnica: Centrifuga a partir de una gradiente de densidad preformada. Separa macromoléculas en moléculas, y no en componentes celulares.
2
Q
que es la cromatografía y qué tipos existen
A
- Permite una filtración molecular.
- El principio básico consta de un solvente con moléculas, que por capilaridad suben por el papel, las más solubles subirán menos que las insolubles
- resina de intercambio iónico: Se basa en la carga molecular. Las moléculas con igual carga serán repelidas y podrán salir antes que las atraídas
- Filtración en gel: Se basa en el peso molecular. El gel tiene orificios internos con diámetro calculado
- Por afinidad: Sistema más específico que trabaja con antígenos y anticuerpos
3
Q
cómo funciona el test elisa
A
- análisis por inmunoabsorción ligada a una enzima
- es un test de alta sensibilidad para detectar y cuantificar muy pequeñas cantidades de proteínas
- Se utilizan columnas con un anticuerpo específico al que se quiere visualizar, para detener moléculas específicas.
- para contabilizar las moléculas retenidas, se usa un 2° anticuerpo que frente a un sustrato se tiñe de un color, midiéndose entonces a través de un equipo calibrado (fotómetro) la intensidad de este para contabilizar cuantitativamente los resultados del test.
4
Q
que es la electroforesis y que tipos hay
A
- Se basa en la electricidad de la corriente continua, separando proteínas, AA y ácidos nucleicos x tamaño y carga eléctrica.
- No trabaja con lípidos ni HDC.
- el principio básico es poner un preparado al centro de un papel con sus dos extremos en contacto con electrolitos de cátodo y ánodo, logrando que las moléculas positivas se
vayan a un lado y las negativas al otro. - Como no todas las proteínas son negativas, hay que tratarlas con una previa denaturación para poder aplicarle electroforesis y que todas se dirijan al ánodo. No así con lo ácidos nucleicos, ya que por naturaleza son todos negativos.
- Western blot: Transferencia de proteínas a un gel.
- Southern blot: transferencia de DNA a un gel.
- Northern blot: Transferencia de RNA a un gel.
5
Q
cuales son los tipos de célula según su potencial de diferenciación
A
- Totipotenciales: Pueden generar un organismo completo (óvulo fertilizado o en etapa de cuatro células).
- Pluripotenciales: Pueden generar todo tipo de células del soma, pero no placenta, amnios y corion.
- Multipotenciales: Pueden diferenciarse a un número pequeño de tipos celulares distintos.
- Unipotenciales: Solo pueden dar origen a un solo tipo de células.
6
Q
que es la criofractura celular y en que consiste
A
- método de corte
- la muestra de tejido se congela bruscamente en nitrógeno líquido, x lo que el paso de agua-hielo no implica aumento del volumen, y por ende, se evita la ruptura celular
7
Q
qué métodos existen para incluir una sustancia no liposoluble a una célula
A
- Inyección x micropipeta: Se pincha célula por célula, es eficiente pero muy lento.
- Electroporación: Cultivo celular se somete a un bajo amperaje, por lo que la MB se polariza y se abre.
- Liposomas: Vesículas que se unen a la célula, depositando su contenido. Muy común en fármacos.
- Disparo de partículas mediante una pistola de genes: Poco eficiente.
8
Q
que son los hibridomas y heterocariontes y para que sirven
A
- Fusión de 2 tipos de células, mediante virus “fusogénicos”.
- Si se fusionan los núcleos se llama hibridoma, pero si no, se llama heterocarionte.
- Durante la proliferación de los hibridomas, predomina la permanencia del genoma de la célula tumoral.
- Se pueden preparar hibridomas con f(x) específica.
- ej: se pueden producir células productoras de anticuerpo antiX. Una vez producido el hibridoma, este se transforma en un productor constante de anticuerpos antiX
