Laboratorio N°4: Electroforesis

Question 1

Para que se utiliza la electroforesis

Answer 1

La electroforesis es una técnica utilizada para separar ADN, ARN o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica

Question 2

La mayoría de las biomoléculas posee una____________, cuya magnitud depende del __________ en el que se encuentran; como consecuencia, pueden desplazarse cuando se ven sometidas a un campo eléctrico hacia el polo de carga ___________ al de la molécula

Answer 2

Carga eléctrica
pH del medio
Opuesta

Question 3

En cuanto a la carga eléctrica que poseen las biomoléculas ¿En que se diferencian las proteínas de los ácidos nucleicos?

Answer 3

Las proteínas pueden poseer carga negativa o positiva, sin embargo el ADN posee carga negativa la cual esta dada por el grupo fosfato

Question 3

Como funciona la electroforesis

Answer 3

Se utiliza una corriente eléctrica para mover las moléculas y que se separen a través de un gel. Los poros del gel permiten que las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que las de mayor tamaño.

Question 4

Previo a la electroforesis de proteínas ¿Cuál es el tratamiento que se realiza con esta biomolécula?

Answer 4

En el caso de las proteínas se realiza pretratamiento con detergentes, como el dodecilsulfato de sodio (SDS), que les confiere carga negativa; con ello se homogenizan las proteínas de la muestra y todas migrarán hacia el polo positivo, y sólo se separarán por tamaño

Question 5

Que permite el análisis de ácidos nucleicos a través de la electroforesis

Answer 5

Permite caracterizar, identificar y aislar DNA o RNA. Ademas permite visualizar la integridad de DNA y/o para evaluar el éxito de la amplificación lograda por reacciones en cadena de la polimerasa (PCR)

Question 6

Que genera el uso de buffer de carga en la visualización de la electroforesis

Answer 6

Los buffers de carga facilitan la visualización y sedimentación del producto de
PCR o de ácidos nucleicos.

Question 7

Mencione los elementos necesarios para realizar una electroforesis

Answer 7

1. Cámara de electroforesis y fuente de poder
2. Gel y peine para pocillos
3. Colorante
4. Buffer de corrida
5. Buffer de carga
6. Marcador de peso molecular
7. Transiluminador

Question 7

De que depende el voltaje que se aplica en los geles de agarosa

Answer 7

Depende de la resolución requerida y del tamaño de los fragmentos a separar.

Question 8

A mayor voltaje, se _________ la velocidad de la corrida del ADN, pero se _____
resolución

Answer 8

Aumenta

Pierde

Question 9

Porque es importante el uso de una fuente de poder en la electroforesis

Answer 9

Esta entrega corriente eléctrica para separar moléculas eléctricamente cargadas, las cuales se mueven bajo la influencia de un campo eléctrico uniforme.

Question 10

Los fragmentos de ADN al tener carga negativa se mueven hacia el________

Answer 10

Polo positivo, es decir, el anodo

Question 11

De que suelen estar hecho los geles que se utilizan en la electroforesis

Answer 11

Suelen estar hechos de un polisacárido llamado agarosa, el cual es extraído de algas de los géneros Gellidium y Gracillaria

Question 12

A mayor concentración de agarosa __________________

Answer 12

Menor será el tamaño de los poros que conforman la rejilla de agarosa y menor la movilidad del ADN.

Question 13

Cual es la concentracion del gel de agarosa recomendada para ver la integridad del ADN o amplificacion por PCR

Answer 13

Es de 0.8% a 1.2%

Question 14

Cual es la utilidad de los ‘‘peines’’

Answer 14

Se hacen ranuras llamadas pozos, en uno de los extremos del gel, en los cuales se colocarán las muestras de ADN

Question 15

Además del gel de agarosa, ¿ De que otro elemento se pueden elaborar los geles?

Answer 15

La acrilamida. El gel de poliacrilamida es el resultado de la polimerización química de una mezcla de acrilamida y bisacrilamida

Question 16

Que determina el tamaño de los poros en un gel de poliacrilamida

Answer 16

La concentración total de acrilamida presente (acrilamida + bisacrilamida), que generalmente se maneja en una proporcion de 19:1

Question 17

Que cuidados se debe tener con la acrilamida

Answer 17

Es esencial almacenarla en un lugar refrigerado, seco y oscuro para reducir la autopolimerización y la hidrólisis. Ademas es una neurotoxina por lo que debe manejarse con suma precaucion

Question 18

Cual es la forma mas habitual para detectar el ADN en los geles de agarosa

Answer 18

Es añadiendo algún compuesto fluorescente (colorante) que se una específicamente a los ácidos nucleicos.

Question 19

Cual es el colorante mas usado para visualizar el ADN en la electroforesis

Answer 19

El bromuro de etidio (BrEt), compuesto con la propiedad de intercalarse entre pares de bases contiguas del ADN,

Question 20

Como se observa el ADN en la electroforesis cuando el gel se tiñe del colorante

Answer 20

Los fragmentos de ADN pueden verse como bandas, las cuales representan un
grupo de fragmentos de ADN del mismo tamaño.

Question 21

Porque se debe tener cuidado al utilizar el Bromuro de etidio

Answer 21

Porque es un compuesto mutagénico

Question 22

Por cual otro colorante se ha reemplazado el uso de Bromuro de etidio

Answer 22

GelRed, que permite la tinción fluorescente de ácidos nucleicos (dsADN, ssADN o RNA

Question 23

Cuales son las ventajas de usar GelRed en lugar de Bromuro de etidio

Answer 23

No es mutagénico ni citotóxico y seguro para el medio ambiente, sin requerir modificaciones en los sistemas de fotodocumentación tanto para la excitación como emisión.

Question 24

Cual es la función del Buffer de corrida

Answer 24

Éste proporciona el medio para la transmisión de la corriente eléctrica y mantiene el pH sin variaciones mientras se realiza la corrida electroforética

Question 25

Que buffers de corrida pueden utilizarse para los acidos nucleicos

Answer 25

TBE o TAE como buffer. El buffer TBE contiene Tris base, ácido bórico y EDTA, y se maneja a un pH de 7.2. El buffer TAE contiene Tris base, ácido acético y EDTA, ajustado a pH 8.5.

Question 26

Para que sirve el buffer de carga

Answer 26

Es un amortiguador tiene como fin brindar peso, densidad y color a la muestra, lo que facilita su depósito en el pocillo y evita su salida del gel; permite, además, monitorear la corrida de la muestra en el gel.

Question 27

Cual es la finalidad de tener marcadores de peso molecular en una electroforesis

Answer 27

Son moléculas de ADN que permiten determinar por comparación el tamaño de los fragmentos de ácidos nucleicos contenidos en las muestras sometidas a electroforesis.

Question 28

De que forma se puede desarrollar una corriente electroforetica

Answer 28

Puede ser desarrollada de forma horizontal o vertical:

Question 29

La corrida electroforética vertical se usa exclusivamente con

Answer 29

Gel de poliacrilamida

Question 30

Para que se utiliza la corrida electroforética vertical

Answer 30

Se utiliza para proteínas o ácidos nucleicos de pequeño tamaño.

Question 31

Que es un transiluminador ultravioleta

Answer 31

Equipo que emite luz en el espectro UV, con un espectro de longitudes de onda que varía entre los 100 y 400 nm