Laboratorio N°3: Fundamentos de la PCR

Question 1

Porque se caracteriza la técnica de PCR

Answer 1

Se caracteriza por ser una técnica de alta sensibilidad, reproducibilidad y
eficiencia, que genera resultados confiables en poco tiempo y fáciles de analizar

Question 2

Cual es la misión u objetivo de la PCR?

Answer 2

Copiar millones de veces una secuencia especifica de DNA, a traves de la enzima Taq polimerasa

Question 3

La PCR se considera una tecnica de tipo ________

Answer 3

Cuantitativa

Question 4

¿Qué es la PCR según el articulo ‘‘Fundamentos de PCR’’?

Answer 4

Es una reacción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente

Question 5

Si la reacción utiliza un sustrato genómico, esta se denomina

Answer 5

PCR convencional

Question 6

Si la reacción utiliza ADN complementario (ADNc) proveniente del ARNm se le conoce como:

Answer 6

RT-PCR

Question 7

Como se logra la conversión de ARNm en ADNc

Answer 7

Esta conversión se logra mediante una reacción conocida como transcripción reversa y controlada por la enzima transcriptasa reversa, capaz de convertir el ARNm en una molécula de ADNc

Question 8

Cuales son los elementos importantes en la reacción de PCR

Answer 8

Templado o molde (ADN o ADNc), 
La enzima, Taq polimerasa 
Los oligonucleótidos o primers, 
Los desoxirribonucleótidos trifosfatados (dNTPs: A, T, C y G),
El ión magnesio (Mg +), 
Una solución amortiguadora o buffer y H2

Question 9

Cuales son las etapas de la PCR

Answer 9

desnaturalización, hibridación y extensión

Question 10

Como se llaman los equipos en donde se ejecuta la reaccion de PCR

Answer 10

Son llamados termocicladores, los cuales están diseñados para establecer un sistema homogéneo en donde las condiciones de temperatura y tiempo necesarios no se modifiquen en cada uno de los ciclos

Question 11

Al final de la reacción ¿Cómo se corrobora si se amplifico la muestra?

Answer 11

Los productos de la PCR o también llamados amplicones son analizados en geles de agarosa para confirmar si la reacción fue exitosa

Question 12

Cual es el elemento principal en la PCR segun el articulo Fundamentos de la PCR

Answer 12

El ADN, el cual esta compuesto por azucar, fosfato y bases nitrogenadas

Question 13

Cuales son las propiedades del ADN que se aprovechan para la PCR

Answer 13

La complementariedad de las bases nitrogenadas, la cual esta dada por puentes de hidrógeno e interacciones hidrofóbicas, generando estabilidad a la doble hélice,

Question 14

Porque esta dada la carga negativa del DNA

Answer 14

Esta dada por los grupos fosfatos

Question 15

Cual es la funcion de la ADN polimerasa en la PCR

Answer 15

Se encarga de la catálisis de la reacción, sintetizando las nuevas cadenas de ADN que llevan la secuencia blanco

Question 16

Cual es la enzima mas usada en la PCR

Answer 16

La Taq ADN polimerasa que proviene de una bacteria termófila llamada Thermus aquaticus, ya que, es capaz de soportar altas temperaturas

Question 17

Que son los primers

Answer 17

Son secuencias de oligonucleótidos que flanquean y delimitan la secuencia blanco que se desea amplificar y son complementarios a ésta.

Question 18

Que características poseen los primers

Answer 18

Generalmente su tamaño oscila entre 15-25 pares de bases y la cantidad de G-C no debe ser más del 55% de la secuencia

Question 19

Que ocurre si no se respetan las características de los primers

Answer 19

Existe la posibilidad de la formación de dímeros de primers, es decir, de productos inespecíficos. Esto repercutiría en el rendimiento de la reacción, así como en la especificidad del producto esperado.

Question 20

Como se denomina el par de primers que se utilizan en la PCR

Answer 20

Una denominada «forward» o sentido y otra «reward» o antisentido; ambas deben estar diseñadas para que hibriden con el templado y las cadenas de ADN puedan
ser extendidas por la Taq polimerasa en dirección 5’-3

Question 21

En que consiste la etapa de desnaturalizacion?

Answer 21

En esta etapa, las cadenas de ADN son calentadas y separadas a una temperatura de 95 °C durante 20-30 segundos

Question 22

En que consiste la etapa de Hibridacion

Answer 22

En esta etapa, los primers se alinean al extremo 3’ del templado previamente separado e hibridan con su secuencia complementaria. Temperatura 55°C

Question 23

En que consiste la etapa de Extensión

Answer 23

En esta etapa, la Taq polimerasa actúa sobre el complejo templado-primers y empieza su función catalítica a una velocidad muy rápida; agrega dNTP’s complementarios para crear las cadenas completas de ADN. Temperatura optima 92°C

Question 24

En que consiste la electroforesis

Answer 24

Consiste en la separación de grandes moléculas como los ácidos nucleicos a través de una matriz sólida que funciona como un filtro para separar las moléculas en un campo eléctrico de acuerdo a su tamaño y carga eléctrica

Question 25

Que facilita la identificación de los amplicones

Answer 25

Deben ser cargados junto con un marcador molecular que contenga un número determinado de segmentos de ADN conocidos

Question 26

La visualizacion de los amplicones se realiza mediante

Answer 26

Se lleva a cabo tomando una foto digital al gel de agarosa expuesto a luz UV; adicionalmente un procesador de imágenes se encarga de analizar las bandas observadas

Question 27

Cual es la cantidad de ciclos que se realizan en una PCR

Answer 27

20-35 ciclos

Question 28

Que ha permitido el desarrollo de la técnica de PCR

Answer 28

Esta técnica ha disminuido el tiempo de trabajo requerido para producir suficiente
material de experimentación, comparado con el tiempo empleado cuando se utilizan los métodos tradicionales de amplificación biológica.

Question 29

Mencione 3 aplicaciones de la PCR

Answer 29

Diagnóstico precoz de determinados tipos de cáncer
Monitorear la quimioterapia del cáncer
La detección de bacterias y virus es posible por ejemplo VIH-1