Diagnóstico Molecular de Enfermedades Infecciosas Flashcards
¿Cual es la identificacion por metodología clasica?
Identificacion fenotipica, principalmente microbiologicas
¿Qué consecuencias genera un tratamiento empirico antes de una identificacion mas precisa?
- Resistencia antimicrobiana
- Efectos secundarios por tratamientos inadecuados
- Mayor gasto relacionado al tratamiento
La biologia molecular, en la clinica sirve para 3 procesos, estos son:
Metodos de screening
Metodo de diagnostico
Metodo de monitoreo
¿Qué evitan las técnicas moleculares?
Evita desarrollo de resistencia antimicrobiana, efectos secundarios por tratamientos inadecuados, y menor gasto relacionado al tratamiento
Nombre algunas ventajas de las técnicas moleculares
Rapidez Alta sensibilidad y especificidad Aplicable a todo tipo de MO y requiere solo su DNA Permite hacer monitoreo de la enfermedad Detección de resistencia (mecA, KPC) Tipificación de MO Tipificacion de brotes
¿Cuales son los tipos de PCR que existen?
PCR multiplex (film array) qPCR (tiempo real) RT-PCR PCR-digital PCR-RFLP
¿Cual es el proposito fundamental de la PCR?
Amplificar exponencialmente un fragmento de ADN
¿Cuales son los componentes de PCR convencional?
- Muestra de ADN
- Primers:
- Enzima ADN polimerasa termoestable
- Sustratos para la enzima.
- Nucleótidos
- Cloruro de Magnesio
Describa la denaturación
Permite transformar una molécula de doble hebra a una de simple cadena mediante la ruptura de puentes de hidrogeno a través de la aplicación de temperaturas elevadas, 94ºC aprox
Describa la etapa annealing
Corresponde a la etapa de donde se delimita de forma específica la zona de amplificación, ya que se unen los primers a una temperatura entre los 40 a 65°C
Describa la etapa de extensión
Etapa que permite la accion de la taq polimerasa subiendo la temperatura sobre 70°C aprox, donde añade nuevos nucleotidos complementarios a la hebra molde originando una nueva molecula de DNA de doble hebra
¿Para que sirve la electroforesis en PCR convencional?
Para determinar si hubo o no amplificación mediante la visualización de bandas utilizando un transiluminador
Cada banda tiene un tamaño determinado, esto permite la comparación con las bandas del fragmento de interés. Si se observa una doble banda quiere decir que __________
La PCR no fue exacta por lo que se amplificaron mas fragmentos que el de interes
La PCR pose una sensibilidad de __________ y una especificidad de ______________ en un tiempo de deteccion entre 1 a __ horas
70 - 99%
86 - 100%
4 horas
¿Como se denomina la PCR que permite la detección cualitativa de varios segmentos de ADN o ARN en una sola reacción de PCR?
PCR multplex
Si PCR multiplex se acopla a qPCR esta tecnica se transforma en una técnica de tipo
Técnica de tipo cuantitativa
¿En que consiste el Film Array?
Corresponde a un sistema comercial de PCR múltiplex certificado donde incluye la preparación de la muestra, la amplificación, detección y el análisis
Clinicamente, ¿que permiten los kits de detección de PCR multiplex?
Identificación y diferenciación simultánea de especies (ej: E. coli)
Detección de genes de resistencia (S. aureus como MecA o IleS-1)
¿Cuantos patogenos puede detectar el FilmArray® Panel Meningitis/Encefalitis (ME)?
14
¿Cuantos patogenos puede detectar el Panel Respiratorio FilmArray™?
20
¿Que subunidades se utilizan para secuenciar bacterias y hongos respectivamente?
16S para bacterias y ITS o genes codificantes de proteínas para hongos
La secuenciación puede hacerse posterior a la _____________
Electroforesis con banda unica
Para la identificación inmediata de la amplificación en qPCR se hace a través de:
Sondas marcadas con un fluorocromo (Sondas TaqMan)
Fluoróforo que se une al ADN de doble hebra (SYBR Green)
¿En que consiste el qPCR?
En una técnica cuantitativa de detección y cuantificación inmediata del fragmento de ADN o ARN amplificado
