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Diagnostico Molecular > Diagnostico Molecular en COVID-19 II > Flashcards

Diagnostico Molecular en COVID-19 II Flashcards

1
Q

Que pruebas de diagnostico sirven para detectar SARS-CoV 2

A

Pruebas moleculares
Pruebas de antígenos
Pruebas de anticuerpos

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Q

Que pruebas diagnosticas determinan si hay una infección activa por el virus

A

Las pruebas moleculares y las pruebas de antigeno

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3
Q

El virus puede ser detectado _______ antes del inicio de los síntomas

A

1-3 días

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4
Q

V o F

La carga viral más alta no necesariamente coincide con el inicio de los síntomas

A

FALSO

La carga viral mas alta coincide con el inicio de los síntomas

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5
Q

Que tipos de muestras encontramos para el diagnostico de COVID-19

A 
Vías respiratorias superiores 
Vías respiratorias inferiores 
Muestras fecales/orina
Muestras de sangre
Muestras post mortem
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6
Q

Para que son utiles las muestras de vias respiratorias superiores

A
  • Detección de infección en fase temprana
  • Casos leves
  • Casos asintomáticos
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7
Q

Que tipos de muestras se buscan en las vias respiratorias superiores

A
  • Hisopado nasofaríngeo
  • Hisopado orofaríngeo
  • Narinas anteriores
  • Cornete medio
  • Saliva
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8
Q

Cuales son los tipos de muestra que recomienda obtener la CDC/OMS en las vias respiratorias superiores

A
  • Hisopado nasofaríngeo

* Hisopado orofaríngeo

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9
Q

V o F

Las pruebas de anticuerpos deberían ser utilizadas para el diagnostico de una infección aguda

A

FALSO

Estas se deben utilizar para evaluar la inmunidad o el grado de efectividad y también para el monitoreo de la infección

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10
Q

Cual son las pruebas gold standar para la deteccion de COVID-19

A

Las pruebas moleculares

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11
Q

Para que son útiles las muestras que se obtienen de las vias respiratorias inferiores

A

Útiles en etapas avanzadas de la enfermedad. Pacientes hospitalizados
Pacientes con alta sospecha de COVID-19 y resultados negativos con muestras de vías respiratorias superiores

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12
Q

Que tipos de muestras se obtienen de las vias respiratorias inferiores

A

Esputo
Aspirado endotraqueal
Aspirado bronquial
Lavado broncoalveolar

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13
Q

Para que sirven las muestras fecales/orinas

A

Detección de ARN viral
Útiles a partir de la segunda semana desde la aparición de los síntomas
Pacientes con alta sospecha de infección pero resultados negativos en muestras respiratorias (superior e inferior)

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14
Q

Cual es la utilidad de la obtención de muestras de sangre/plasma/suero

A

Evaluación de la seroconversión y evaluación del titulo de anticuerpos

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15
Q

Cual es la temperatura optima para el transporte de muestras de virus

A

De 2-8°C

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16
Q

Que es lo que se sugiere al obtener un exudado faríngeo y nasofaríngeo

A

El exudado faríngeo y nasofaríngeo se deben colocar en el mismo tubo para incrementar la carga viral

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17
Q

Que es lo que se recomienda para la obtención del lavado bronquial

A

Se requiere como mínimo 2mL (1 ml del lavado y 1 ml del medio de transporte)

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18
Q

En que tipo de laboratorio se recomienda hacer el manejo de muestras de pacientes COVID-19

A

En un laboratorio nivel de bioseguridad (BSL) 2

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19
Q

Que características posee la técnica RT-PCR para el diagnostico de COVID-19

A

Permite detectar presencia del virus (Infección activa), desde las primeras fases de infección
Posee una elevada sensibilidad
No requiere una prueba de seguimiento

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20
Q

V o F

RT- PCR permite detectar si ya se ha superado la enfermedad

A

FALSO

No permite detectar si ya se ha superado la enfermedad, solo indica la presencia del virus

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21
Q

La RT-PCR será capaz de detectar hasta ________ de iniciado los síntomas.

A

3 días antes

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22
Q

Cuales son las regiones del genoma mas utilizadas para el diagnostico de COVID-19 a través de RT-PCR

A

Gen E
Gen RdRp
Gen N

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23
Q

En zonas con circulación viral comunitaria es suficiente la _____________ gen(es)

A

Positividad de un único

24
Q

Mencione una característica del perfil térmico para el ensayo RT-PCR para el diagnostico de SARS-CoV-2

A

La temperatura de alineamiento y extensión ocurren a la misma temperatura lo que permite que el ciclaje sea más rápido

25
Q

Cuales son las sondas mas utilizadas para el diagnóstico de COVID-19 en RT-qPCR

A

Las sondas TaqMan porque son regiones especificas para los genes que se quieren amplificar

26
Q

Que es el CT en qPCR

A

Corresponde al ciclo de PCR en el cual la fluorescencia es mayor a la fluorescencia de fondo, es decir, el ciclo en el cual se detecta amplificación.

27
Q

Porque es importante establecer el CT en el diagnostico de COVID

A

Porque esto permite establecer la carga viral que presenta la muestra

28
Q

A menor CT, _______ concentración de DNA

A mayor CT, _______ concentración de DNA

A

Mayor

Menor

29
Q

Que limitaciones presenta la RT-PCR para el diagnostico de COVID-19

A

El proceso dura alrededor de 3 hrs, en la práctica puede tardar hasta 8 hrs o más
Requiere equipamiento y reactivos de alto costo
Se pueden producir falsos positivos y negativos

30
Q

Que falsos positivos se pueden producir en RT-PCR

A

Contaminación cruzada entre muestras, esto es infrecuente, ya que, los primers son muy especificos

31
Q

Mencione falsos negativos que pueden producirse por la RT-PCR

A

Carga viral muy baja
Mala toma de muestra
Muestra insuficiente
Inhibidores de la PCR
Muestras tomadas en fases muy tardías o muy tempranas de la enfermedad
Inadecuado transporte (perdida cadena de frio)

32
Q

Para que son útiles los test de antígenos

A

Útiles para detectar una infección activa.

Basados en inmunocromatográfica

33
Q

Los test de antígenos se caracterizan por ser _____________ pero con baja ____________

A

Especificas

Sensibilidad

34
Q

Cuando se debe realizar idealmente el test de antígenos y porque

A

Se debe realizar idealmente entre el 5º y 7º día post inicio de los síntomas (período de mayor carga viral)

35
Q

Que antígenos son los que se buscan detectar por los test de antígenos

A
  • Antígenos N (Es el más abundante en el virus)
  • Subunidades S1 y S2 de la proteína S
  • Dominio RBD de la proteína S
36
Q

Que características poseen los test de antígenos

A 
Poseen una sensibilidad del 95% entre el 5to y 7mo día, luego de eso la sensibilidad baja drásticamente.
Especificidad del 100%
Rápido 
Sencillo
De fácil interpretación
37
Q

Que falsos positivos se pueden generar en los test de antígenos

A

Reacciones cruzadas con otras infecciones bacterianas o virales

38
Q

Que falsos negativos se pueden generar en los test de antígenos

A

Baja carga viral

Toma de muestra antes del 5º día o después del 7º día post infección

39
Q

El test de detección de anticuerpos se considera una ____________ a RT-PCR

A

Prueba complementaria

40
Q

Que tipo de anticuerpos se buscan contra el SARS-CoV-2

A

IgM, IgA e IgG

Ac. neutralizantes y no neutralizantes

41
Q

Porque se dirige la busqueda a Anticuerpos de tipo IgA contra el SARS-CoV2

A

Los Ac. IgA se encuentran en las mucosas, y el estudio de muestras nasofaríngeas corresponden a zonas mucosas

42
Q

Que características poseen los test de anticuerpos

A

No son útiles para diagnóstico de infección activa o en curso
Útiles para determinar si un paciente se encuentra inmunizado
Su aparición es variable

43
Q

En que días se ha establecido la aparición de IgM e IgG en pacientes infectados

A

IgM dia 12
IgG dia 14
Esto no permite determinar si la infeccion fue reciente

44
Q

Como se puede interpretar un resultado positivo de IgM

A
  • Aparición en fase temprana y desaparición a las pocas semanas
  • Persona ha estado expuesta al virus SARS-CoV-2 recientemente
  • Infección puede o no estar en curso
45
Q

Como se puede interpretar un resultado positivo de IgG

A

 Aparición en fase tardía de la enfermedad, pueden durar meses
 Paciente ha estado expuesto al virus SARS-CoV-2

46
Q

Según el ISP el estudio de anticuerpos:

A

o No permiten cuantificar nivel de Ac
o No recomendados para el diagnóstico agudo
o No sirven para evaluar la inmunidad generada por la vacuna. Se requerirá estudio de Ac
neutralizantes

47
Q

Que falsos negativos se pueden presentar en los test de Anticuerpos

A

o Infección muy reciente (aún no hay formación de Ac)

o Pacientes con carga viral muy baja

48
Q

Que falsos positivos se pueden presentar en los test de Anticuerpos

A

o Reacciones cruzadas: Ac frente a otros Coronavirus u otros microorganismos tales como: Virus sincitial respiratorio, Coronavirus Común NL63 de Mycoplasma pneumoniae o afecciones preexistentes como embarazo o enfermedades autoinmunes

49
Q

Que son los anticuerpos neutralizantes

A

Son una subpoblación de Ac que reduce la capacidad infectiva de un virus durante un cierto período.

50
Q

Donde están dirigidos los anticuerpos neutralizantes del Sars-CoV-2

A

Normalmente estos Ac están dirigidos a la proteína S. Evitan que el virus se una al receptor ACE 2 evitando la infección.
Al estar unidos al virus se produce la opsonización por lo que también promueven lisis de las partículas virales

51
Q

Para que se utilizan los ensayos de neutralización del virus

A

Prueba de referencia para detectar presencia de Ac neutralizantes funcionales contra el virus, esta prueba es utilizada en laboratorios de referencia o de investigación.

52
Q

Que tipo de laboratorio se requiere para un ensayos de neutralización del virus

A

Nivel de seguridad BSL-3

53
Q

Como se interpreta la presencia de Ac neutralizantes

A

Porque se presenta un menor número de placas respecto al control

54
Q

En que consiste la técnica de CRISPR-Cas13

A

Uso de la enzima CAS-13a que tiene capacidad de cortar ARN, por lo que no requiere de retro transcripción.
Se activa gracias a una secuencia de ARN guía que es complementaria a la región del ARN viral que se desea cortar, y al cortar se produce una señal fluorescente que puede ser detectada.

55
Q

A que zonas del genoma del Sars-CoV-2 estan dirigidas las enzimas de CRISPR-Cas13

A

Gen de la proteína S y gen ORF1ab

56
Q

Que características posee la técnica CoNVat

A

Técnica basada en nanotecnología biosensora óptica
Aplicado directamente a la muestra del paciente
Permite la detección en menos de 30 minutos

57
Q

Que aplicaciones tiene la secuenciación genómica del SARS-CoV-2

A
  • Caracterización del virus
  • Seguimiento de la propagación del virus
  • Diseñar test diagnósticos, fármacos y vacunas (idealmente centrados en moléculas o regiones con baja probabilidad de sufrir cambios)
  • Detectar mutaciones y surgimiento de variantes
  • Estimar prevalencia de las variantes
  • Evaluar efectividad de tratamientos como los Ac monoclonales dirigidos a determinadas variantes

Diagnostico Molecular (14 decks)

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