Item 293 - Médecin préleveur de cellules

Question 1

Techniques morphologiques : cytologie

Answer 1

• conditionnement
• fixation
• réhydratation
• coloration = MGG, Papanicolaou
• analyse au microscope

Question 2

Techniques morphologiques : histologie

Answer 2

• fixation de plusieurs heures selon volume échantillon (dissection + re-fixation si gros échantillon)
• déshydratation
• imprégnation
• inclusion e nparaffine
• bloc de paraffine à couper en lamelles de 4 um
• disposition sur lame
• déparaffinage
• réhydratation
• coloration = HES
• analyse au microscope

Question 3

Techniques morphologiques : immunohistochimie

Answer 3

> directe = immunofluorescence
anticorps fixé à fluorochrome, se lie à antigène d’intérêt
révélation au microscope à fluorescence

> indirecte = immunohistochimie
anticorps se lie à antigène d’intérêt, second anticorps fixé à enzyme se lie au complexe anticorps-antigène, ajout d’un substrat de l’enzyme pour colorer
révélation au microscope standard

Question 4

Techniques morphologiques : hybridation in situ

Answer 4

• déparrafinage, réhydratation des lames
• digestion protéolytique
• co-dénaturation sonde + ADN cible
• hybridation sonde et ADN cible

sonde associée à :

• fluorochrome = FISH
• enzyme = CISH

Question 5

Techniques de biologie moléculaire : principes et intérêts

Answer 5

• extraction acide nucléique à partir de tissu, déparaffinage, digestion enzymatique, purification, formation d’amplicon PCR (rappel stage de M1 ++)
• puis séquençage Sanger, pyroséquençage, snapshot, PCR spécifique d’allèle, analyse de fragment, séquençage nouvelle génération (NGS)

permettent test :

• diagnostic
• pronostic
• théranostic (indications ou contre-indications aux thérapies ciblées)

Question 6

Principales indications des tests théranostiques de biologie moléculaire

Answer 6

Cancer du côlon métastatique :
- KRAS, NRAS (contre-indique Ac monoclonaux anti-EGFR)

Cancer bronchique non à petites cellules :
- EGFR, ALK, ROS (indique inhibiteur tyrosine kinae)

Mélanome méstastatique :
- BRAF (indique inhibiteur BRAF)

Cancer du sein métastatique + Cancer de l’estomac métastatique :
- ERBB2 (indique Ac monoclonaux anti-ERBB2)

GIST :
- c-KIT, PDGFRB (indique inhibiteur tyrosine kinase)

Question 7

Principales indications des tests diagnostiques de biologie moléculaire +++

Answer 7

Sarcomes :
- MDM2, CDK4

Cancer colorectaux :
- instabilité microsatellites (syndrome de Lynch)

Lymphomes :
- clone B, T

Gliomes :
- codélétion 1p/19q, mutation IDH1 et 2

Question 8

Principales indications des tests pronostiques de biologie moléculaire

Answer 8

Neuroblastome :

- amplification NMYC

Question 9

3 cas où les tumeurs doivent être immédiatement adressés en extemporanés

Answer 9

• tumeurs pédiatriques
• sarcomes
• hémopathies

(à envoyer non fixé, à l’état frais, en moins de 30 min)