Immundiagnostik: Fluoreszenz Flashcards
Wie definiert sich der Begriff Fluoreszenz?
Atom vom Grundzustand durch Absorbtion eines Photons zu einem Zustand höherer Energie angeregt
- stammt absorbiertes Photon aus dem UV-Bereich und liegen Frequenzen der emittierten Photonen im sichtbaren Bereich des Spektrums wird Phänomen als Fluoreszenz bezeichnet
Was ist der Stokes-Shift?
→ Rückkehr in Grundzustand über eine Reihe von zwei (oder mehr) Übergängen
emitierte Photonen:
niedrigere Energie und Frequenz als absorbiertes Photon (= Stokes Shift)
Erklären Sie das Prinzip der Fluoreszens!
- Elektronen eines Fluorophors werden durch Auftreffen eines Photons (hνEx) in einen angeregten Zustand S1´versetzt.
- Angeregter Zustand existiert für etwa 1 – 10 nsec. Energie geht durch Interaktionen und Zustandsänderungen z.T. verloren und führt zum Zustand S1.
- Beim Zurückspringen des Fluorophors auf den Grundzustand S0 werden Photonen (hνEm) emittiert. Durch den Verlust an Energie von S1´ auf S1 ist die Energie dieser Photonen (hν) geringer, folglich ist die Wellenlänge des emittierten Lichts λ (= c/ν) größer.
Wie wird die Immunfluoreszenz angewendet?
schonende Markierung mit FITC → Verwendung in Mikroskopie oder Durchflußzytometrie
Was bedeutet die Abkürzung RIA?
Radio-Immuno- Assay
Welche Formen der RIA gibt es ?
- klassischer RIA
- Kompetitiver RIA
- Nichtkompetitiver RIA
Beschreiben Sie den klassischen und den Kompetitiven RIA!
klassisch:
ein Reaktionspartner als Tracer radioaktiv* markiert (^125J)
kompetitiv:
• Serum (größere Menge Ag) + geringe Menge Ak + größere Menge Ag*
• Konkurrenz des Ag mit Ag* um Bindungsstellen → je höher Ag-Konzentration im Serum, desto weniger Ag* gebunden
Beschreiben Sie den Nichtkompetitiven RIA!
- Immuno-Radiometrischer Assay
- Ak wird im Überschuss zugeführt, bindet Ag also quantitativ
- Ak an feste Phase gebunden
- Bindung des gesuchten Ag aus Probe
- Zugabe Tracer-Ak* im Überschuss
- Auswaschen des überschüssigen Ak*
- Messung des Ak* aus der Schichtung Ak-Ag-Ak*-Sandwich-Prinzip
- direkte Proportionalität der Radioaktivität zur Ag-Konzentration
- Vorteil: Einsatz bei Ag, die durch die Messung verändert werden
- Nachteil: Ag muss mindestens 2 Ak-Bindungsstellen besitzen
Was bedeutet der Begriff “RAST”?
Radioallergosorbent-Assay
Was beinhaltet das RAST?
- Identifikation des Allergens
- Ag an feste Phase gebunden
- Zugabe des Patientenserum mit Ak (IgE)
- Waschen, Zugabe des Tracers Ak+ Anti-IgE
- direkte Proportionalität der Radioaktivität zur Ak-Konzentration
Was bedeutet die Abkürzung “ELISA”?
enzyme linked immuno sorbent assay
Was beinhaltet ELISA?
Anhand spezifischer Bindungsreaktion zwischen Antigen und Antikörper wird das ELISA-Testsystem z.B. zur Bestimmung von Antigenen- oder Antikörper-Konzentrationen (=Titern) durchgeführt
Dabei muss jeweils eine Eichkurve erstellt werden
Der ELISA kann im Prinzip zur Bestimmung jedes Antigens, Haptens oder Antikörpers ausgearbeitet werden
Welche ELISA Verfahren gibt es?
- die kompetitive Methode
- die Sandwich-Methode
- indirekter ELISA
Erklären Sie die ELISA_Verfahren
Siehe Handyfoto
