Immundiagnostik: Durchflusszytometrie Flashcards
Was ist Inhalt der Durchflusszytometrie?
- Methode zur automatisierten Differenzierung und Zählung von Zellen und Mikropartikeln
- Zellen in Suspension passieren in engem Strom einzelner Zellen in hohem Tempo eine elektrischen Spannung oder einen fokussierten Lichtstrahl (Laser, UV-Lampe)
- sequentielle Generierung optischer (Streulicht, Fluoreszenz) oder elektrischer Signale für jeden einzelnen Partikel bzw. Zelle
- Form, Struktur und / oder Färbung der Zellen → Eigenschaften der Zelle
- Analyse von 100.000 Zellen (und mehr) pro Minute in Echtzeit
- Messung von bis zu 16 zellspezifischen Parametern
- Detektionslimit ‹ 100 fluoreszierende Moleküle pro Zelle
- Methode um Blutbild Herzustellen
Was bedeutet die Abkürzung FACS?
fluorescence activated cell sorting
Was beinhaltet die FACS?
Form der Durchflusszytometrie, bei der Fluoreszenz-markierte Zellen je nach Färbung in unterschiedliche Reagenzgefäße sortiert werden. (FACS = geschützte Handelsmarke eines Geräteherstellers)
Was beinhaltet die Leukozytendifferenzierung durch eine Immunfluoreszenz-Analyse?
kombinierte immunologische und physikalische Messprinzipien; Laser:
• Mehrfarbenfluoreszenzanalyse (Anregung: 488 nm) nach Bindung fluoreszenzmarkierter Ak an Zelloberflächenmarker
• Lichtstreumessung
• Vorwärts-Streulicht als Maß für Zellgröße
• 90°-Seitwärts-Streulicht als Maß für intrazelluläre Granularität
• Darstellung im Dot Plot
• auch zur präparativen Isolierung (Cellsorter) von Ak-markierten Zellen
• Vorteil: Immunotypisierung von morphologisch einheitlichen aber funktionell unterschiedlichen Leukozyten-Subpopulationen
