Einführung Flashcards
Virion
Viruspartikel
Capsid
Protein welches das Genom umhüllt, normalerweise symmetrisch, besteht aus Capsomeren (=Untereinheiten)
Capsomer
UE des Capsids
Nucleocapsid
Capsid und Genom
Tegument
Raum zwischen Hülle und Capsid bei einigen behülten Viren, gefüllt von Proteinen -> heöfen bei Replikation und immune escape
Membran (Aufbau)
Zellmembran der Wirtszelle mit einglagerten Virusproteinen (Membranproteinen) -> Hüll/Glykoproteine
Schritte der Virusreplikation -> Entry bis Release
binding entry uncoating (genome release) gemone amplification gene expression particle esembly particle release
Arten des viralen Entry + Beispiele
Behüllte Viren:
- Membranfusion: durch Membranprotein-Rezeptor Interaktion, z.B. HIV
- Endocytose bei einer coated pit (Membranvertiefung die IZR von Clathrin umgeben ist), Capsid und genome release durch Ansäuerung im Endosom (Induziert Strukturveränderung), z.B. Polio, Hepatitis
Unbehüllte Viren:
- Endocytose: Rezeptorbindung, aus Vesikel dann Injektion des Genoms in die Zelle, z.B. Phagen, Picornaviren
Plaque-Assay
ein Verfahren zum Nachweis und zur Quantifizierung von infektiösen cytopathischen Viren, bei dem eine zu untersuchende Probe in unterschiedlichen Verdünnungen in eine Zellkultur eingebracht wird -> Viren führen zur Lyse der Zelle und infizieren die Nachbarzellen -> pro Viruspartikel bildet sich eine leere Fläche in dem Zellrasen der nach Färbung der Platte weiß/ungefärbt erscheint
Abzählen der PFU (plaque forming units)
Messung der Infektiosität mittels (Tests)
Plaque-Assay
Flourescence Focus Assay (FFA)
Tissue culture infectious dose 50 assay (TCID_50)
Flow Cytometry
FFA
flourescence focus assay
- einfacher als Plaque-Assay, ghäufiger verwendet und reproduzierbarer
- auch für nicht-cytopathische Viren (Plaque-Assay und TCID_50 nutzlos)
- Verwendung von Fluoreszenz-gelabelden AK gegen virale Ag
TCID_50 Assay
tissue culture infectious dose 50 assay
- Auftragen der VIruslösung in verschiedenen Konzentrationen
- zählen wann 50% der Zellen infiziert sind
- niedere Viruskonzentrationen bedeuten höhere Infektösität
- nur bei cytopathischen Viren
VIrusquantifierung anhand …
Infektiösität (PFU, FFA, TCID_50, FC)
Proteinquantifikation (H-Assay, ELISA, RIA)
Genomquantifikation (rtPCR)
Virale Klassifizierung (Kriterien)
DNA vs RNA
ss vs ds
behüllt vs unbehüllt
unbehüllte DNA Viren
ss: Parvoviren (Parvo B19)
ds: Adenovirus, Papillomavirus (HPV)