Diagnóstico y técnicas moleculares Flashcards
En qué patologías se usa principalmente el diagnóstico molecular?
Patología infecciosa
Qué células cogemos para estudiar en una muestra sanguínea?
Leucocitos
Para qué sirve el ficol?
Para separar las células sanguíneas de una muestra sanguínea por densidad
Qué material empleamos para separar las células de una muestra sanguínea?
Ficol
Pasos para el aislamiento de proteínas
1- Homogeneización mecánica y química (SDS)
2- Nucleasas
3- Centrifugación; recogemos el líquido de arriba
Para qué sirve el SDS?
Homogeneización química de una muestra
Qué hacemos para aislar los núcleos de una muestra de DNA?
Romper la mb sin romper los núcleos, luego centrifugamos la muestra con un gradiente de densidad de sacarosa y finalmente resuspendemos los núcleos
Pasos para el aislamiento de DNA
1- Homogeneización mecánica y química (SDS)
2- Proteinasa K y RNAasas
3- Centrifugación y F/C: extraemos el líquido de arriba
4- Precipitación con alcohol
5- Resuspensión
Qué significa el pico 260 nm en la espectrofotometría?
Ácidos nucleicos
Qué significa el pico 280 nm en la espectrofotometría?
Proteínas
Qué significa el pico 320 nm en la espectrofotometría?
Contaminación con moléculas raras
Qué cociente usamos para saber si hay contaminación de proteínas en un aislamiento de DNA?
260 / 280 < 1,8
Qué significa el pico 230 nm en la espectrofotometría?
Contaminación con azúcares, sales, solventes…
Qué materiales necesitamos para realizar una secuenciación de Sanger?
ddNTPs fluorescentes, nucleótidos normales, cebadores y DNApol
Qué cociente usamos para saber si hay contaminación por solventes o sales en una muestra de ácidos nucleicos?
260 / 230 < 2
En base a qué parámetros separa las partículas una centrifugación?
Forma, densidad y tamaño
Qué conseguimos centrifugar a velocidades bajas?
Células y mb que no se han roto, núcleos y citoesqueleto
Qué determina la velocidad de migración de las partículas en una electroforesis?
La relación entre su carga neta por unidad de masa –> se separan por TAMAÑO
Para qué sirve la RT-PCR?
Retrotranscripción de un fragmento de RNA en DNA
Qué geles usamos en una electroforesis?
Agarosa (ácidos nucleicos) y poliacrilamida (ácidos nucleicos y proteínas)
Pasos de una hibridación Southern / Northern blot
1- Electroforesis del DNA o RNA
2- Lo pasamos a una mb de soporte
3- Añadimos una sonda fluorescente complementaria al fragmento que queremos estudiar
Para qué sirve la q-PCR?
Cuantificar relativamente si en una muestra hay más cantidad de DNA que en otra: se usan sondas fluorescentes complementarias a cada hebra que desnaturalizamos
Qué enzima usamos en una PCR?
Taq-ADNpol
Para qué sirve la PCR digital?
Cuantificar exactamente la muestra gracias a compartimentalización y cuantificación de moléculas individuales: realizamos miles de mediciones en vez de una solamente.
Cómo se realiza una hibridación in situ?
Añadimos sondas de DNA fluorescente a cada cromosoma
Pasos de la secuenciación por rotura química
1- Desnaturalización de la muestra
2- Amplificación
3- Marcaje fluorescente en 5´
4- Rotura química con cuatro compuestos
En qué se basa la pirosecuenciación?
Método de secuenciación que emite una señal lumínica con cada liberación de pirofosfato al añadir un nucleótido nuevo a la cadena
Cómo se leen los resultados de una secuenciación de Sanger?
Mediante electroforesis capilar
Con qué técnica podemos hibridar proteínas?
Western blot, IHQ o IF
Qué podemos hibridar en una muestra Western blot?
Proteínas
Qué podemos hibridar en una muestra Southern blot?
DNA o RNA
Cómo realizamos una hibridación por microarrays?
1- Extraemos mRNA de cada muestra
2- Hacemos ADNc
3- Pasamos el ADNc a unos pocillos con sondas fluorescentes: si detectan sonda complementaria se quedan pegados
Qué son los oligont sinsentido?
Terapia génica que emplea oligont complementarios al mRNA de un gen que queramos inhibir
Qué tipo de terapia génica es el CRISPRCas?
Edición génica
