Diagnóstico y técnicas moleculares

Question 1

En qué patologías se usa principalmente el diagnóstico molecular?

Answer 1

Patología infecciosa

Question 2

Qué células cogemos para estudiar en una muestra sanguínea?

Answer 2

Leucocitos

Question 3

Para qué sirve el ficol?

Answer 3

Para separar las células sanguíneas de una muestra sanguínea por densidad

Question 3

Qué material empleamos para separar las células de una muestra sanguínea?

Answer 3

Ficol

Question 3

Pasos para el aislamiento de proteínas

Answer 3

1- Homogeneización mecánica y química (SDS)
2- Nucleasas
3- Centrifugación; recogemos el líquido de arriba

Question 4

Para qué sirve el SDS?

Answer 4

Homogeneización química de una muestra

Question 4

Qué hacemos para aislar los núcleos de una muestra de DNA?

Answer 4

Romper la mb sin romper los núcleos, luego centrifugamos la muestra con un gradiente de densidad de sacarosa y finalmente resuspendemos los núcleos

Question 5

Pasos para el aislamiento de DNA

Answer 5

1- Homogeneización mecánica y química (SDS)
2- Proteinasa K y RNAasas
3- Centrifugación y F/C: extraemos el líquido de arriba
4- Precipitación con alcohol
5- Resuspensión

Question 5

Qué significa el pico 260 nm en la espectrofotometría?

Answer 5

Ácidos nucleicos

Question 5

Qué significa el pico 280 nm en la espectrofotometría?

Answer 5

Proteínas

Question 6

Qué significa el pico 320 nm en la espectrofotometría?

Answer 6

Contaminación con moléculas raras

Question 7

Qué cociente usamos para saber si hay contaminación de proteínas en un aislamiento de DNA?

Answer 7

260 / 280 < 1,8

Question 7

Qué significa el pico 230 nm en la espectrofotometría?

Answer 7

Contaminación con azúcares, sales, solventes…

Question 7

Qué materiales necesitamos para realizar una secuenciación de Sanger?

Answer 7

ddNTPs fluorescentes, nucleótidos normales, cebadores y DNApol

Question 8

Qué cociente usamos para saber si hay contaminación por solventes o sales en una muestra de ácidos nucleicos?

Answer 8

260 / 230 < 2

Question 8

En base a qué parámetros separa las partículas una centrifugación?

Answer 8

Forma, densidad y tamaño

Question 9

Qué conseguimos centrifugar a velocidades bajas?

Answer 9

Células y mb que no se han roto, núcleos y citoesqueleto

Question 9

Qué determina la velocidad de migración de las partículas en una electroforesis?

Answer 9

La relación entre su carga neta por unidad de masa –> se separan por TAMAÑO

Question 10

Para qué sirve la RT-PCR?

Answer 10

Retrotranscripción de un fragmento de RNA en DNA

Question 10

Qué geles usamos en una electroforesis?

Answer 10

Agarosa (ácidos nucleicos) y poliacrilamida (ácidos nucleicos y proteínas)

Question 10

Pasos de una hibridación Southern / Northern blot

Answer 10

1- Electroforesis del DNA o RNA
2- Lo pasamos a una mb de soporte
3- Añadimos una sonda fluorescente complementaria al fragmento que queremos estudiar

Question 10

Para qué sirve la q-PCR?

Answer 10

Cuantificar relativamente si en una muestra hay más cantidad de DNA que en otra: se usan sondas fluorescentes complementarias a cada hebra que desnaturalizamos

Question 10

Qué enzima usamos en una PCR?

Answer 10

Taq-ADNpol

Question 11

Para qué sirve la PCR digital?

Answer 11

Cuantificar exactamente la muestra gracias a compartimentalización y cuantificación de moléculas individuales: realizamos miles de mediciones en vez de una solamente.

Question 11

Cómo se realiza una hibridación in situ?

Answer 11

Añadimos sondas de DNA fluorescente a cada cromosoma

Question 12

Pasos de la secuenciación por rotura química

Answer 12

1- Desnaturalización de la muestra
2- Amplificación
3- Marcaje fluorescente en 5´
4- Rotura química con cuatro compuestos

Question 12

En qué se basa la pirosecuenciación?

Answer 12

Método de secuenciación que emite una señal lumínica con cada liberación de pirofosfato al añadir un nucleótido nuevo a la cadena

Question 13

Cómo se leen los resultados de una secuenciación de Sanger?

Answer 13

Mediante electroforesis capilar

Question 14

Con qué técnica podemos hibridar proteínas?

Answer 14

Western blot, IHQ o IF

Question 14

Qué podemos hibridar en una muestra Western blot?

Answer 14

Proteínas

Question 14

Qué podemos hibridar en una muestra Southern blot?

Answer 14

DNA o RNA

Question 15

Cómo realizamos una hibridación por microarrays?

Answer 15

1- Extraemos mRNA de cada muestra
2- Hacemos ADNc
3- Pasamos el ADNc a unos pocillos con sondas fluorescentes: si detectan sonda complementaria se quedan pegados

Question 15

Qué son los oligont sinsentido?

Answer 15

Terapia génica que emplea oligont complementarios al mRNA de un gen que queramos inhibir

Question 16

Qué tipo de terapia génica es el CRISPRCas?

Answer 16

Edición génica