Diagnostic de laboratoire Flashcards
Quelles sont les 3 phases du cheminement diagnostiques
- Phase pré-analytique
- Phase analytique
- Phase post-analytique
Donner 5 étapes de la phase pré-analytique
- Patient consulte avec des symptômes/signes d’une maladie infectieuse
- Diagnostic clinique tentatif
- Prescription de prélèvements de culture
- Prélèvements identifiés au nom + numéro d’assurance maladie du patient puis acheminés au laboratoire avec la demande d’analyses
- Réception des prélèvements au laboratoire
Donner 8 étapes de la phase analytique
- Examen direct sur le prélèvement
- Rapport partiel émis au médecin : interprétation
- Mise en culture du prélèvement
- Incubation des milieux ensemencés
- Lecture des milieux (le lendemain)
- Identification bactérienne
- Rapport partiel: interprétation
- Finalisation de l’identification
Donner 2 étapes de la phase post-analytique
- Émission du rapport final
- Interprétation finale du médecin
Quelles sont les 4 raisons pour effectuer un examen direct?
- Quantifier les globules blancs présents dans le prélèvement: ceci nous informe sur la réponse inflammatoire et la «purulence» de l’échantillon.
- Dans certains cas, exprimer en valeur relative la quantité de polynucléaires présents dans le prélèvement
- Observation de micro-organismes pour poser un diagnostic présomptif (bactéries, éléments mycéliens, levures, structures parasitaires, inclusions virales)
- Évaluation de la qualité du prélèvement pour décider si le résultat final sera fiable
Nommer 4 examens directs effetués de façon routinière
- Sérum physiologique
- Hydroxyde de potassium (KOH)
- Iode
- Fond noir
Qu’est-ce que permet le sérum physiologique? (2)
- permet d’observer la mobilité de certains micro-organismes
- permet d’évaluer rapidement les micro-organismes avec des formes particulières, ex.: levures
Décrire l’examen direct par hydroxyde de potassium et son utilité
- KOH 10 % digère la kératine
- utile pour diagnostiquer des éléments mycéliens (champignons) à partir de prélèvement d’ongles, de peau et de cheveux
Décrire le diagnostic direct par iode et donner son utilité
- colore les noyaux et organelles cytoplasmiques
- utile pour colorer rapidement les selles d’un patient et diagnostiquer la présence de protozoaires (ex.: amibes)
Quelle est l’utilité du diagnostic direct par fond noir?
- utile pour mettre en évidence des micro-organismes mal visualisés en microscopie optique standard et qui se colore difficilement (ex. : spirochète)
Nommer 2 types d’examens directs avec coloration
- Coloration de Gram *****
- Coloration de Ziehl-Neelson
Quel est le principe de la coloration de Gram?
La teneur en lipide de la paroi cellulaire des bactéries est variable.
Les parois pauvres en lipides retiennent plus le colorant cristal
violet (Gram positif).
** Pauvre = Positif **
Quand la paroi est riche en lipides, le cristal violet ne s’imprègne pas de façon permanente. Le décolorant le déloge (Gram négatif).
Quelles sont les 10 étapes techniques de la coloration de Gram?
1) étaler sur une lame une couche mince du prélèvement à colorer
2) fixer à la chaleur
3) cristal violet (1 minute)
4) laver
5) iode (1 minute) pour bien fixer le cristal violet
6) décolorer quelques secondes à l’acétone alcool
7) laver
8) safranine (1 minute)
9) laver, assécher
10) lire au microscope
Quelle est l’interprétation d’une bactéries colorée de couleur bleue par coloration de Gram?
Le cristal violet n’a pas été décoloré par l’acétone alcool: la contre-coloration à la safranine (rose) a été inefficace. La couleur finale de la bactérie est bleue ce qui implique une paroi pauvre en lipide : bactérie Gram positif (ex. : Staphylococcus).
Quelle est l’interprétation d’une bactéries colorée de couleur rose par coloration de Gram?
La paroi est riche en lipides. Le cristal violet est facilement libéré de la paroi par le décolorant. La contre-coloration avec la safranine est possible car la paroi est libre de colorant : bactérie Gram négative (ex. : Escherichia coli).
Quelles sont les 4 utilités de la coloration de Gram ?
- Permet de reconnaître rapidement le ou les bactéries possiblement pathogènes présentes dans le prélèvement et d’en informer rapidement le clinicien.
- Permet d’évaluer la présence ou l’absence de flore normale quand le prélèvement provient d’un site non stérile.
- Permet d’évaluer la réponse inflammatoire car les globules blancs sont colorés dans le processus.
- Permet de quantifier de façon relative les polynucléaires versus les cellules mononucléées. Ceci aide dans certains cas à distinguer les infections bactériennes des infections virales.
Quel est le principe de la coloration de Ziehl-Neelsen?
La paroi de certains micro-organismes est épaisse et cireuse et ne se colore pas facilement. Une fois les parois colorées par contre elles résistent à la décoloration par un solvant tel l’acidealcool. Ces bactéries sont appelées par conséquent « bacilles acido-alcoolo résistants » ou B.A.A.R.
Quelles sont les 8 étapes techniques de la coloration de Ziehl-Neelsen?
1) préparer une lame à partir du prélèvement comme la coloration de Gram
2) « carbol fuchsin »
3) laver
4) acide-alcool
5) laver
6) bleu de méthylène
7) laver, assécher
8) lire au microscope
Quelle est l’interprétation d’une bactéries colorée de couleur rose par coloration de Ziehl-Neelson?
La paroi épaisse et cireuse a capté le premier colorant de la coloration de Ziehl-Neelsen (« carbol fuchsin ») et a résisté au décolorant. La contre-coloration au bleu de méthylène s’est avérée inefficace. La couleur finale est rose. Il s’agit d’un bacille acido-alcoolo résistant (BAAR) ex.: mycobactéries.
Quelle est l’interprétation d’une bactéries colorée de couleur bleue par coloration de Ziehl-Neelson?
La paroi plus mince de la bactérie, moins imperméable que dans le cas précédent, a pris le « carbol fuchsin » (rose) mais n’a pas résisté au décolorant. La contre-coloration avec le bleu de méthylène a été possible. La couleur finale est bleue. Il ne s’agit pas d’un bacille acido-alcoolo résistant.
Quelles sont les 2 utilités de la coloration Ziehl-Neelson?
- Permet l’identification présomptive des mycobactéries sans pouvoir les identifier à l’espèce.
- D’autres germes sont des B.A.A.R., ex.: Nocardia
Quelles sont les 4 caractéristiques macroscopiques d’une culture
- forme de la colonie
- couleur de la colonie
- grosseur de la colonie
- présence ou non d’hémolyse autour de la colonie
Donner 5 exemples d’identification préliminaire de bactéries selon l’aspect macroscopique
Donner les 5 étapes de l’identification finale d’une culture
- performance de tests biochimiques à partir des colonies
- rapport partiel
- identification finale de la bactérie
- performance de l’antibiogramme
- émission du rapport final
Quels sont les 2 types de prélèvements permetant l’interprétation des résultats de culture?
- Prélèvement à partir d’un site normalement stérile
- Prélèvement à partir d’un site non stérile
Quelles sont les sites normalement stériles du corps?
Le sang et tous les liquides biologiques
(liquide céphalo-rachidien, liquide synovial, liquide pleural)
Quels sont les 2 types de pathogènes retrouvés dans le prélèvement à partir d’un site normal&
- Pathogènes classiques
- Présence de germes autres
Quelle est l’interprétation de la présence d’un pathogène classique dans un prélèvement à partir d’un site normalement stérile?
Lorsqu’un pathogène classiquement associé à une infection d’un liquide normalement stérile est mis en évidence, le médecin qui prend connaissance du rapport considère que l’infection suspectée ou non est confirmée
Quelle est l’interprétation de la présence d’autres germes dans un prélèvement à partir d’un site normalement stérile?
Exemple :
Présence de Cutibacterium acnes (agent bactérien impliqué dans l’acné) dans le liquide céphalorachidien d’un adolescent chez qui on veut éliminer la présence d’une méningite.Le Cutibacterium n’est pas un agent classiquement associé aux méningites bactériennes.
Pour prélever le liquide céphalorachidien, on pique à travers la peau vis-à-vis la colonne lombaire. Si la ponction est difficile (plusieurs piqûres avant d’obtenir le liquide), il est possible d’introduire des germes dans le liquide qu’on prélève. On parle alors de contamination lors du prélèvement et le germe identifié n’est pas considéré comme pathogène.
Définir ce qu’est un site non stérile et donner 4 exemples
On entend par site non stérile un site où il est connu qu’une flore normale s’y retrouve (bouche, vagin, peau, rectum ou selles)
Quels sont les 2 critères à respecter pour bien interpréter les résultats de cultures obtenus à partir de sites non stériles?
- connaître la flore normale de ces sites
- porter attention seulement aux bactéries qui ne font pas partie de cette flore ou qui sont reconnues pour causer des infections.
Quelles sont les 2 méthodes utilisées pour un diagnostic rapide?
- Détection rapide d’antigène
- Méthode moléculaire
Décrire la détection rapide d’antigène dans le diagnostic rapide
Diverses méthodes existent sur une base commerciale pour détecter rapidement la présence d’antigènes (souvent des protéines de surface) caractéristique de certains micro-organismes.
D’autres tests rapides sont disponibles pour identifier en quelques minutes la présence d’influenza de type A à partir d’échantillon respiratoire.
En quoi consiste le diagnostic rapide par méthode moléculaire?
- Consitste à amplifier une partie du génome du germe à identifier dans un premier temps (amplifier = générer de multiples copies d’une portion du génome).
- Par la suite, il suffit d’appliquer une méthode de détection de la portion du génome maintenant amplifiée pour confirmer la présence d’un pathogène suspecté.
Quelle est l’utilité de la méthode moléculaire lors du diagnostic rapide?
Ces méthodes sont particulièrement utiles quand le germe à détecter se cultive difficilement ou qui se trouve en faible quantité dans un prélèvement donné, ce qui rend sa détection difficile
** C’est le cas du virus herpès simplex (associé au « feux sauvages » et à l’herpès génital) qui peut causer des encéphalites. La recherche d’herpès par culture standard s’avère souvent infructueuse à partir d’un prélèvement de liquide céphalorachidien. Par contre, l’application d’une méthode d’amplification de type PCR (« Polymerase Chain Reaction » ou Test d’amplification des acides nucléiques (TAAN)) à partir du même liquide céphalorachidien révèle habituellement la présence d’herpès simplex. **
Qu’est-ce que la sérologie
Mettre en évidence des preuves indirectes de la présence d’un agent infectieux
Au lieu de détecter le germe directement, il s’agit ici de détecter la présence d’anticorps spécifiques produits par le patient colonisé ou infecté par un germe. Ces anticorps produits par le système immunitaire sont présents dans le sérum de la personne atteinte d’où l’appellation générale « sérologie ».
Qu’elle est l’utilité de la sérologie?
La recherche d’anticorps est particulièrement utile pour faire le diagnostic des infections virales, les virus étant en général plus longs et difficiles à mettre en évidence par culture.
Nommer 5 virus ou maladie où la sérologie est la méthode diagnostique la plus utilisée pour poser un diagnostic infectieux
- virus d’immunodéficience humain (VIH)
- hépatite A, B, C
- rougeole
- rubéole
- varicelle
Quels sont les 2 types d’anticorps utilisés en microbiologie diagnostique?
- Anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type M ou IgM
- Anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type G ou IgG
Décrire les anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type M ou IgM
Ils apparaissent en phase aiguë de la maladie et leur présence indique une infection actuelle ou très récente (ex.: hépatite A)
Quand un médecin demande une sérologie de l’hépatite A, c’est l’anticorps de type M ou IgM qui est recherché sur le sérum du patient.
Décrire les anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type G ou IgG
En phase de convalescence d’une infection, c’est ce type d’anticorps qui est produit et qui confère une immunité long terme contre l’agent infectieux en question.
Au début d’une infection, les IgG sont absents. Quand un deuxième sérum est prélevé aux moins deux semaines plus tard, la présence d’IgG spécifiques à l’infection en cause est documentée.
Qu’est-ce que la séroconversion?
C’est le passage des IgG de négatif à positif
Le principe de la séroconversion s’applique à la vaccination
⇒
la recherche d’anticorps est effectuée sur un premier échantillon de sérum pris avant la vaccination et sur un deuxième échantillon prélevé quelques semaines post-vaccination.
