diagnostic de labo des infections Flashcards
Qu’est ce que la phase pré-analytique?
- Patient consulte avec des symptômes/signes d’une maladie
infectieuse - Diagnostic clinique tentatif
- Prescription de prélèvements de culture
- Prélèvements identifiés au nom du patient puis acheminés au
laboratoire avec la demande d’analyses - Réception des prélèvements au laboratoire
Qu’est ce que la phase analytique?
- Examen direct sur le prélèvement
- Rapport partiel émis au médecin : interprétation
- Mise en culture du prélèvement
- Incubation des milieux ensemencés
- Lecture des milieux (le lendemain)
- Identification bactérienne
- Rapport partiel: interprétation
- Finalisation de l’identification
Qu’est ce que la phase post-analytique?
- Émission du rapport final
- Interprétation finale du médecin
Quelles sont les raisons pour effectuer un examen direct?
- Quantifier les globules blancs présents dans le prélèvement: ceci nous informe sur la réponse inflammatoire et la « purulence » de l’échantillon.
- Dans certains cas, exprimer en valeur relative la quantité de polynucléaires présents dans le prélèvement
- Observation de micro-organismes: bactéries, éléments mycéliens (champignons), levure, structures parasitaires, inclusions virales pour poser un diagnostic présomptif.
- Évaluation de la qualité du prélèvement pour décider si le résultat final sera fiable
Quels sont les examens directs?
- sérum physiologique
- hydroxyde de potassium (KOH)
- iode
- fond noir
Quelle est l’utilité du sérum physiologique?
- permet d’observer la mobilité de certains micro-organismes
- permet d’évaluer rapidement les micro-organismes avec des formes
particulières, ex.: levures
Quelle est l’utilité de l’hydroxyde de potassium?
- KOH 10 % digère la kératine
- utile pour diagnostiquer des éléments mycéliens (champignons) à partir de prélèvement d’ongles, de peau et de cheveux
Quelle est l’utilité de l’iode?
- colore les noyaux et organelles cytoplasmiques
- utile pour colorer rapidement les selles d’un patient et diagnostiquer
la présence de protozoaires (ex.: amibes)
Quelle est l’utilité du fond noir?
utile pour mettre en évidence des micro-organismes mal visualisés en microscopie optique standard et qui se colore difficilement (ex. : spirochète)
Quels sont les examens directs avec coloration?
coloration de Gram, coloration de Ziehl-Neelsen
Quel est le principe de la coloration de Gram?
La teneur en lipide de la paroi cellulaire des bactéries est variable. Les parois pauvres en lipides retiennent plus le colorant cristal violet (Gram positif). Quand la paroi est riche en lipides, le cristal violet ne s’imprègne pas de façon permanente. Le décolorant le déloge (Gram négatif).
Quelle est la technique de la coloration de Gram?
- étaler sur une lame une couche mince du prélèvement à
colorer - fixer à la chaleur
- cristal violet (1 minute)
- laver
- iode (1 minute) pour bien fixer le cristal violet
- décolorer quelques secondes à l’acétone alcool
- laver
- safranine (1 minute)
- laver, assécher
- lire au microscope
Comment s’interprète la coloration de Gram?
Bactérie de couleur bleue:
Le cristal violet n’a pas été décoloré par l’acétone alcool: la contre-coloration à la safranine (rose) a été inefficace. La couleur finale de la bactérie est bleue ce qui implique une paroi pauvre en lipide : bactérie Gram positif (ex. : Staphylococcus).
Bactérie de couleur rose:
La paroi est riche en lipides. Le cristal violet est facilement libéré de la paroi par le décolorant. La contre-coloration avec la safranine est possible car la paroi est libre de colorant : bactérie Gram négative (ex. : Escherichia coli).
Quelles sont les utilités de la coloration de Gram?
- Permet de reconnaître rapidement le ou les bactéries possiblement pathogènes présentes dans le prélèvement et d’en informer rapidement le clinicien.
- Permet d’évaluer la présence ou l’absence de flore normale quand le prélèvement provient d’un site non stérile.
- Permet d’évaluer la réponse inflammatoire car les globules blancs sont colorés dans le processus.
- Permet de quantifier de façon relative les polynucléaires versus les cellules mononucléées. Ceci aide dans certains cas à distinguer les infections bactériennes des infections virales.
Quel est le principe de la coloration de Ziehl-Neelson?
La paroi de certains micro-organismes est épaisse et cireuse et ne se colore pas facilement. Une fois les parois colorées par contre elles résistent à la décoloration par un solvant tel l’acide- alcool. Ces bactéries sont appelées par conséquent « bacilles acido-alcoolo résistants » ou B.A.A.R.
