Cours 6

Question 1

Expliquer la sélection clonale.

Answer 1

Chaque cellule reconnaît un antigène spécifique. La réponse de la cellule T à son antigène permet le clonage spécifique pour cet antigène.

Question 2

Avec qui se fait la présentation de l’antigène aux lymphocytes T?

Answer 2

CMH I = lymphocytes T CD8

CMH II = lymphocytes T CD4

Question 3

Quels sont les 2 modèles de récepteurs?

Answer 3

• 2 récepteurs séparés, l’un reconnaissant le CMH
  et l’autre reconnaissant l’antigène (« double récepteur »).
• 1 seul récepteur, capable de reconnaître l’antigène
  complexé avec une molécule du CMH du Soi (« Soi
  modifié »).

Question 4

Caractéristiques d’une cellule à un seul récepteur (3).

Answer 4

• Récepteur spécifique des cellules T ou récepteur T
  (RCT)
• permet la reconnaisance de l’antigène (peptide) en
  association avec le CMH du soi (classe I ou II)
• restriction au CMH

Question 5

Quelles sont les difficultés rencontrées chez le TCR (5)?

Answer 5

• Les cellules T devaient posséder un récepteur antigène spécifique et clonotypique (différent d’une cellule T à l’autre)
• Identification tardive par rapport aux anticorps
• Récepteur membranaire (pas de forme soluble)
• Interaction plus faible avec l’antigène que les anticorps
• Spécifique pour l’antigène et le CMH

Question 6

Vrai ou faux : il existe des différences structurales (séquence a.a.) importantes entre les RCT de différentes cellules T.

Answer 6

Vrai

Question 7

Comment faire pour identifier/isoler le RTC (3 étapes)?

Answer 7

• une cellule T spécifique pour l’antigène ovalbumine aura un RCT différent d’une cellule T spécifique pour le KLH; ceci est attendu afin que le RCT puisse interagir avec le complexe peptide
antigénique-CMH de façon spécifique

• chaque cellule T porte un RCT de séquence (a.a.) différente

• on devrait donc pouvoir produire des anticorps reconnaissant le RCT et utiliser ces anticorps pour caractériser biochimiquement le RCT

Question 8

Comment générer des cellules T spécifiques pour un antigène donné (3 étapes)?

Answer 8

• Immunisation de souris avec un antigène (par exemple OVA ou ovalbumine) afin de faire proliférer les cellules T réactives (spécifiques) envers l’antigène OVA

• Récolte des ganglions lymphatiques 7 jours plus tard (contiennent un mélange de cellules T spécifiques à l’antigène OVA et de cellules T
non-spécifiques)

• Expansion des cellules T spécifiques à l’antigène OVA in vitro en cultivant les cellules des ganglions lymphatiques avec l’antigène (fera proliférer les cellules T spécifiques de l’antigène mais pas les autres cellules T)

Question 9

Comment faire la création d’un hybridome T spécifique à un antigène donné (2 étapes)?

Answer 9

• Fusion des cellules T spécifiques à l’antigène, ici OVA, avec une lignée de cellule T cancéreuse (croit indéfiniment en culture)

• Clonage par dilution limite afin d’avoir un hybridome T qui possède une séquence unique de RCT permettant de reconnaitre l’antigène OVA

Question 10

Expliquer l’expérience qui a permis d’isoler le TCR (7 étapes).

Answer 10

1- Génération d’un hybridome d’une cellule T avec une spécifité d’antigène connue

2- Ajout de glycol polyéthylène pour induire la fusion des cellules T antigène-spécifique avec les cellules T de longue vie

3- Diluer chaque cellule fusionnée pour qu’elles contiennent un seul hybridome de cellule T. Permettre les cellules de se diviser et de former des clones et tester son abilité à sécréter IL-2 quand stimuler avec des peptides d’ovalbumine.

4- Production d’anticorps qui se lient avec le TCR sur l’hybridome de la cellule T

5- Fusionner les cellules B de l’échantillon avec les cellules B de longue terme

6- Sélection et amplification des clones qui sécrètent des Ac qui se fixent aux hybridomes T

7- Identification des anticorps monoclonaux qui interfèrent avec l’antigène reconnu par les hybridomes des cellules T

Question 11

Caractéristiques du TCR (6).

Answer 11

• Membre de la superfamille des immunoglobulines

• Chaque chaine possède 2 domaines de 60-75 aa
contenant chacun un pont di-s intrachaine

• Nter variation marquée de la séquence d’un RCT à l’autre: domaine variable ou V; 3 régions hypervariables dans V

• Proximal à la membrane, domaine constant ou C

• Région transmembranaire de 21-22 aa, contiennent des résidus chargés positivement, inhabituel pour un domaine membranaire

• Courte queue cytoplasmique en Cter

Question 12

Que permet le réarrangement du TCR?

Answer 12

-juxtaposition aléatoire des segments V, D et J permet d’obtenir un grand nombre de RCT différents

Question 13

Pourquoi les espaceurs des SSR font 12 ou 23
paires de base (2)?

Answer 13

A. Afin de permettre aux enzymes participants à la
recombinaison VDJ de lier à la bonne séquence
d’ADN

B. Afin de positionner les RSS du même coté de la
double hélice d’ADN afin de les rendre accessibles
à une même enzyme

Question 14

Vrai ou faux : Sur les chaînes a et B il y a les segments V, D et J.

Answer 14

Faux : Sur le segment a, il y a seulement les segments V et J

Question 15

Quels sont les types de RSS des segments V, D et J et où sont-ils positionnés?

Answer 15

V : espacer de 12 pb, côté 3’

D : espacer de 12 (5’) et 23 (3’) pb, de chaque côté

J : espacer de 23 pb, côté 5’

Question 16

Comment se fait le mécanisme moléculaire de la recombinaison VDJ (8 étapes).

Answer 16

1- Formation de la synapse : Les protéines RAG1/2 et GMH se lient aux RSS et catalyse la formation d’une synapse entre les segment V et J

2- Clivage : RAG1/2 clive l’endroit exact du RSS 5’ des segments V et J

3- Trans-estérification : Le groupement hydroxyl attaque le groupement phosphate sur la branche non codante du segment V ce qui donne deux branches indépendantes : codante et signal

4- Ouverture de l’épingle à cheveu par Artemis

5- Ajout des P-nucléotides : Le clivage de l’épingle à cheveu génère des sites pour l’addition de P-nulcéotides

6- Action des exonucléases : Seulement dans les segments VD et DJ sur les chaînes lourdes = Le clivage de l’exonucléase résulte en une perte de nucléotides codants

7- Ajout de N-nucléotides par Tdt : Non-templated nucléotides sont ajoutés sur le segment codant par Tdt

8 : Ligation : Ligation de la chaine lourde par l’ADN ligase et les protéines NHEJ

Question 17

Caractéristiques du complexe CD3 (7).

Answer 17

• Cinq chaînes invariantes (y, z, e, c, n) exprimées avec le RCT à la surface cellulaire.
• Requis pour l’expression du RCT à la surface cellulaire
• Dimères ye, ez, cc (90%) et cn (10%).
• Résidu aspartate (-) dans le transmembranaire.
• Longues régions intracytoplasmiques.
• Motifs d’activation (« ITAM », ou « immunoreceptor
  tyrosine-based activation motifs ») dans les régions
  intracytoplasmiques
• Impliqués dans la transduction du signal.

Question 18

Comment est l’affinité du TCR avec CMH?

Answer 18

L’affinité du RCT pour le complexe antigène-CMH est plutôt FAIBLE

Lien avec la sélection thymique (sélection négative des RcT à haute affinité)

Besoin de MOLÉCULES ACCESSOIRES pour augmenter l’avidité de l’interaction intercellulaire

ADHÉSINES

CO-RÉCEPTEURS

Question 19

Vrai ou faux : Le TCR reconnaît l’antigène seul.

Answer 19

Le RCT ne reconnaît pas l’antigène seul, mais un antigène (peptide) apprêté complexé à une molécule de CMH du Soi.

Question 20

À quoi ressemble la structure des TCR?

Answer 20

La structure du RCT (domaines variables et constants) est semblable à celle des immunoglobulines de surface (« superfamille »).

Question 21

Définir TCR.

Answer 21

Le RCT est un hétérodimère encodé par des segments géniques discontinus et polymorphes, rassemblés par un processus de réarrangement (recombinaison) somatique semblable à celui utilisé lors de la biosynthèse des anticorps.

Question 22

Quels sont les mécanismes qui contribuent à la diversité du TCR?

Answer 22

Les mécanismes qui contribuent à la diversité du RCT sont essentiellement les mêmes que ceux utilisés par les immunoglobulines, mis à part l’hypermutation somatique.

Ce processus implique des séquences signal de recombinaison (règles d’appariement 12-23) et les enzymes Rag1 et Rag2, qui initient et catalysent le réarrangement des segments de gènes du RCT

Question 23

La jonction VJ ou VDJ code pour qui? Comment est-elle et est la conséquence de quoi?

Answer 23

La jonction V-J ou V-D-J code pour le CDR3 et est hypervariable.

Cette hypervariabilité est la conséquence de l’ajout de P- et N- nucléotides et de l’activité d’exonucléases lors de la juxtaposition des segments V-J et V-D-J

Question 24

Comment se fait la reconnaissance du complexe ternaire peptide-CMH par le TCR?

Answer 24

La reconnaissance du complexe ternaire peptide-CMH par le RcT se fait via l’interaction des domaines hypervariables CDR3 (jonction V-J ou V-D-J) des
deux chaines du RCT avec le peptide niché dans la cavité de la molécule de CMH tandis que les domaines hypervariables CDR1 et CDR2 (codé dans le segment de gènes V) interagissent principalement avec le CMH.

Question 25

Vrai ou faux : Le TCR est associé au CD3.

Answer 25

Vrai : Le RcT est associé au CD3, un complexe polypeptidique dont la fonction est de permettre l’expression du RcT à la surface et de transmettre les signaux d’activation transmembranaires.

Question 26

Que sont les molécules accessoires? Que permettent-elles?

Answer 26

Diverses molécules accessoires participent à l’interaction entre les cellules T et les CPA (cellules présentatrices d’antigènes).

Ces molécules permettent l’augmentation de l’avidité entre la cellule T et la CPA; certaines d’entre elles servent aussi à la transduction du signal (CD4, CD8).

Question 27

Quels sont les rôles des principaux co-récepteurs des cellules T (4)?

Answer 27

• Intéractions spécifiques avec le CMH I (CD8)
• Intéractions spécifiques avec le CMH II (CD4)
• Participent à la signalisation (lie la tyrosine kinase Lck)
• Définissent deux grandes familles de cellules T (TH, TC)