Cours 6 Flashcards
Quelles sont 4 techniques de visualisation de la structure du SN?
Préparation de tissus
Visualisation de structures
Visualisation d’expression des gènes et protéines
Visualisation des circuits
Pourquoi étudier la structure du SNC? (2)
Générer des hypothèses concernant la fonction des différents neurones
Savoir comment ils influencent les circuits neuronaux et comportementaux
Quelle était la théo de Cajal?
De la structure à la fonction
Les neurones sont les unités structurelles et fonctionnelles de base du système nerveux.
Quelles sont les 4 principes de la doctrine neuronale?
le neurone est l’unité structurelle et fonctionnelle fondamentale du système nerveux
les neurones sont des cellules discrètes qui ne sont pas continues avec d’autres cellules
le neurone est composé de 3 parties –les dendrites, l’axone et le corps cellulaire
l’information circule le long du neurone dans une direction (des dendrites à l’axone, via le corps cellulaire)
Comment se fait la préparation des tissus? (4 grandes étapes)
Le tissu neural est délicat et dégradable
Il est nécessaire de préserver le tissu quasi in vivo
Les 4 grands étapes:
Fixer
Disséquer
Envelopper
Faire des sections
Comment se fait la fixation? Pourquoi on le fait?
Utilisation des produits chimiques pour préserver, stabiliser, et renforcer l’échantillon pour en faire des analyses microscopiques
◦Renforcer les interactions moléculaires
◦Désactiver les enzymes protéolytiques
◦Éliminer les microorganismes qui les dégradent
Quels sont 2 types d’agents de fixation?
«cross-linking»: ◦Formation des liaisons covalentes Les aldéhydes: formaldéhyde, para formaldéhyde, glutaraledéhyde Usage: microscopie photonique Osmium tetroxide(oxydation) Usage: microscopie électronique
Déshydratation:
◦Perturbation des lipides, réduction de la solubilité des protéines
Méthanol, acétone
Quels sont 2 modes de fixation?
Immersion:
◦Temps requis dépend de la taille/épaisseur du tissu
Perfusion transcardiaque:
◦Par pénétration du ventricule gauche
Comment se fait la dissection? (3)
retirer le cerveau du crâne
microdisséquer les régions d’intérêt, si nécessaire
◦la decision est basée sur le type d’analyses qui suivent
Comment se fait la cryopréservation? (3)
Le tissue est submergé dans un solution de 30% sucrose pour 48-72hr
l’eau peut endommager les tissus à la congélation
Le sucrose remplacel’eau, le tissu devient moins flottant
L’enveloppement sert à quoi? Quels sont 4 exemples d’agents utilisés?
Stabiliser la structure du tissu Faciliter les coupes ◦OCT ◦Gélatine ◦Paraffine ◦Plastique
Comment on fait des sections? (3 machines et leurs caractéristiques)
Microtome
Congelé ou non-congelé
OCT, paraffine, plastique
Section moyenne: 25-100 μm
Cryostat
Congelé
-20C à -30C
Section mince: 10-50 μm (je fais 7 μm)
Vibratome Lame vibrante Non-congelé Possibilité d’utiliser avec des tissus vivants Section épaisse: 100-400 μm
Quelles sont les 3 coupes possibles?
Coronale
Sagittale
Horizontale/Transverse
avant de faire l’enveloppement, il fait décider quels coupes on va faire pcq fait enveloppement diff selon plan de coupe
Comment se fait la visualisation des morpho? (4)
75% de la masse du cerveau est composée d’eau
Les sections sont transparentes!
Il est nécessaire d’avoir un contraste entre les structures spécifiques pour les distinguer des structures aqueuses
Utilisez des colorants pour visualiser les structures
Quels sont les colorants du soma?
Colorants basophiles ◦pH>8 (basique) ◦Marque des molécules acides (ADN, ARN) Noyaux et ribosomes ◦Les exemples non-fluorescents: Cresylviolet (Nissl) Hematoxyline Thionine Les teintures Nisslpréfèrent l’ARN (RER, ribosomes) qui est plus abondant dans les neurones Fluo: Marqueurs des noyaux par l’intercalation entre les spirales hélicoïdales de l’ADN DAPI Hoechst (bisbenzamide) Propidiumiodide
Les teintures basophiliques permettent quoi? (2)
◦l’examen de l’architecture cellulaire
◦La visualisation des aspects macroscopiques des régions distinctes du cerveau
Qu’est-ce qu’un colorant des fibres? (3)
Marque la myéline de la matière blanche
Utilisé en combinaison avec des colorants basophiles sur des sections adjacentes
Attention: impossible d’identifier des fibres individuelles