Cours 15

Question 1

QU’est-ce que l’analyse de type Southern sur l’ADN génomique ?

Answer 1

-permet analyser état ADN sans l’avoir cloné en :
1-digérant ADN génomique avec des enzymes de restrictions (on veut que fragments migrent selon leur taille)
2-faire migrer les fragments par électrophorèse et transfere sur une membrane
3-déterter emplacement des séquences particuliere sur la membrane par hybridation avec une sonde oligonucléotidique marquée.
-on peut donc voir sil une séquence ADN dans sonde est présente dans un génome quelconque.

Question 2

Comprendre comment la méthode de transfert de Southern a permis d’établir l’existence
d’introns dans les gènes eucaryote

Answer 2

-via le gèene de l’ovalbumine. Il contient des sites EcoRI. Attendu qu’il y ait seulement un site pas cest pas cela qu’on a eu ce qui a prouvé l’existence d’introns dans ADN génomique ADN.

Question 3

Analyse de type Northern sur ARNm ?

Answer 3

-permet de savoir dans quel tissus un gène est exprimé et quelle est la longueur de l’ARNm du gène + niveau expression gène.
-FONCTIONNEMENT :
1-Extraire ARN total du tissu en le séparant de LADN + prots.
2-Migration ARN par électropho sur gel aga pour séparer les especes arnm selon la longeur de leur fragment. (avec des marqueurs de longuers)
3-transfert sur filtre de nylon
4-hybridation sonde marquer au 23p qui est spécifique au gene dintéret + LAVER
5-autoradiographie (bandes noires apparaissent)

Question 4

• Maîtriser les concepts de brassage d’exons et de correspondance entre exons et domaines
protéiques

Answer 4

• Brassage d’exons : échange exons entre genes qui a eu lieu au cours de l’évolution sur a des cassures dans les introns
• chaque domaine protéine dcorrespond à un ou many exons
• protéine = strcuture composée de many domaines (LDL premiers cas a etre mis en évidence)

Question 5

Connaître les différents types de mutations pouvant entraîner une perte de fonction.

Answer 5

• inactivation via changements de la région codante : faux sens, non sens, délétion et changements de cadre
• mutations dans le promoteur : ponctuelles, délétions.
• mutations touchant l’épissage -> donne des alleles amorphes ou hypomorphes.

Question 6

Cas allélisme multiples et non ?

Answer 6

• exemple de l’anémie falciforme : 1 seule mut dun codon particulier peut la provoquer -> il ny a dpnc pas dallélismes multipke, car un seul allele muté provoque le maladie
• exemple récepteur LDL : allélisme multilple : 1000 mutations différentes chez des familles. De toute sorte pour inactiver un gene en changeant la region codante : faux sens, non sens, délétion prom.

Question 7

sites variants/invariants ?

Answer 7

• invariants =au debut et fin de l’intro -> amorphes., mutations de ces sites seront hypomorphes.
• séquences consensus : pas invariantes autour du site dépissage.

Question 8

Savoir ce qu’est la recombinaison homologue non-allélique et comprendre comment elle
peut mener à l’inactivation de certains gènes.

Answer 8

• Les LCR (répétitions à faible abondance) peuvent entrainer de la recombinason homologue non-allélique.
• Même s’il ne s’agit pas de 2 allèles du meme gene, le fait qu’il se ressemblent bcp peuvent amener de la recombinaison homologues entre elles.
• Peut se produire entre 2 chromosomes différents ou non.
• Pourrait être impliquée dans bcp de maladies.
• séquences courtes répétée (3) expliquerait la fréqeunces élevée d’inversioon avec translocation dans la region du télomere du chromo x. –> favorise le c.o. intrachromosomal et donc créer des inversions avec translocation.
• c.o. intrachromosomal = inversion avec translocation.