Cour 12 - Méthodes de dosage des hormones Flashcards
Décrire les différentes familles de structure moléculaire des hormones (3)
Décrire un peu plus largement la dernière catégorie.
- Peptides et protéines ± 360 dA - dizaine kDa
- Stéroides et dérivés ± 300 Da
- Autres:
Dérivés d ’acides aminés»_space;> T4 et T3, catécholamines, sérotonine, épinéphrine
Dérivés d ’acide nucléique»_space;> cAMP
± 200 daltons
Les hormones : nature chimique
- Peptides et protéines
Quel range de taille en kDa?
TRH (Thyrotropin-releasing hormone) 359.5 Da
hCG, Gonadotrophine chorionique humaine 36.7 kDa
Les stéroides sont des molécules qui partagent toutes le même squelette de base: le noyau stérol
Dessine en un.
Précurseur de la vitamine D est le?
Cholestérol
Variations et transformations de structure
Modifications post-traductionnelles
Gly________, sia_______, p___________
Pré___ et pr_________
Disp________ d’une ____-u___
Di_____, mac__________
Formes par_________ mé________ (o_____)
Formes co_______ (_______, gl_________…)
Formes l____ ou l____ à des p________
Variations et transformations de structure
Modifications post-traductionnelles
Glycosylation, sialylation, phosphorylation
Prépro et prohormones
Disproportion d’une sous-unité
Dimères, macrohormones
Formes partiellement métabolisées (oxydée)
Formes conjuguées (sulfatée, glucuronidée…)
Formes libres ou liées à des protéines
Quel sont des considérations cliniques importantes à prendre en compte chez le patient avant le dosage? (8)
- Sexe
- Âge:
-Période de la croissance rapide
-Évolution puberté (échelle de Tanner)
-Ménopause/Andropause - Cycle nycthéméral»_space;> Heure du prélèvement
- Cycle menstruel
- Ovulation, grossesse, allaitement
- Niveau de stress
- Aliments:
À jeun ou après repas
Restrictions alimentaires à considérer - Médicaments:
Hormonothérapie de remplacement
Autres Rx, restrictions à considérer
Autres produits en vente libre ou interdits
Hormone total vs libre
Pour quel genre de molécule de quel taille?
Activité biologique est proportionnelle à?
Influence hépatique?
Demie-vie?
Pour les petites molécules avec transporteurs comme les stéroïdes et T4/T3.
La concentration de l’hormone libre dans le sang et non à celle de l’hormone liée. Notion de fraction biodisponible
Influence hépatique sur la synthèse des transporteurs et sur la concentration de l’hormone totale.
Demie-vie plus longue des fractions liées
Pré analytique; sang; prélèvement
Sérum; tubes utilisés? Hormone pélevé?
Plasma; tubes utilisés? Hormone pélevé?
Détail additionels plasma? (2 et demi)
Sérum: Tube rouge (vide) ou or (gel séparateur+silice)
Hormones thyroïdiennes
Hormones stéroïdiennes
Hormones protéiques stables
Plasma: Tube lavande (EDTA Na/K)
Hormones peptidiques (plus fragiles)
Tube prérefroidi
Éch conservé sur glace + stabilisé sans délai (<30 min)
Au besoin, ajouter inhibiteur de protéase sans délai
Pré analytique; Urine; prélèvement
Sur une miction (dépistage, test qualitatif)
Sur une collecte de 24 heures (quantitatif / jour)
-Reflet de la c_________ s_______ m________
Pré analytique; Urine; prélèvement
Sur une miction (dépistage, test qualitatif)
Sur une collecte de 24 heures (quantitatif / jour)
-Reflet de la concentration sérique moyenne
Pré analytique; Salive; prélèvement
Prélèvement f_____ et n__ i_______
Reflet de l’________ li____ dans le s____.
(ex.:cortisol et autres stéroïdes)
Mais exige une méthode plus s________ car fa______ concentrations.
Pré analytique; Salive; prélèvement
Prélèvement facile et non invasif
Reflet de l’hormone libre dans le sang.
(ex.:cortisol et autres stéroïdes)
Mais exige une méthode plus sensible car faibles concentrations.
Plus la Ka est _______, plus l’Ac a de l’______ pour l’Ag, plus il se lie rapidement et complètement, et par conséquent, moins il permet la liaison avec d’autres a_______ ou pr_______.
Lorsque l’affinité de l’anticorps est grande, la sensibilité et la spécificité de l’immunoessai s’__________ et les effets de matrice sont _________.
Plus la Ka est élevée, plus l’Ac a de l’affinité pour l’Ag, plus il se lie rapidement et complètement, et par conséquent, moins il permet la liaison avec d’autres antigènes ou protéines.
Lorsque l’affinité de l’anticorps est grande, la sensibilité et la spécificité de l’immunoessai s’améliorent et les effets de matrice sont moindres.
Dans les immunoessais, la formation de la composante AgAc (antigène-anticorps) peut être quantifiée directement par:
- Visualisation de la p__________ du complexe immun formé.
- En mesurant la l_________ d_________ (néphélémétrie) ou a________ (turbidimétrie) par les complexes immuns formés.
- Visualisation de la précipitation du complexe immun formé.
- En mesurant la lumière dispersée (néphélémétrie) ou absorbée (turbidimétrie) par les complexes immuns formés.
Immunoessai compétitif 1 Anticorps en une étape
Qu’est-ce qui est fixe?
Qu’est-ce qui est limitant?
Proportionalité?
Fixe = Anticorps, Ag marqué
Limitant = Anticorps
Mesure de Ac-Ag* est inversement proportionnelle à la concentration de l’Ag à doser. Important pour la biotin car elle t’amène à surestimer tes résultats si en excès.
Immunoessai compétitif 1 Anticorps en 2 étapes
Saturation séquentielle
Qu’est-ce qui est fixe?
Qu’est-ce qui est en excès?
Se fait en deux étapes, quelle sont-elles?
Fixe = Anticorps, Ag marqué
Excès = Anticorps et Ag marqué
1) Ag présenté à un excès d ’Ac (l’échantillon)
2) Ag* ajouté en excès pour saturer les sites laissés libres et compétitionner avec Ag lié.
Essai immunométrique (2 Anticorps) «Sandwich »
Qu’est-ce qui est fixe?
Qu’est-ce qui est en excès?
Proportionalité?
Fixe = Anticorps-fixé et Anticorps marqué
Excès = Anticorps-fixé et Anticorps marqué
La mesure des complexes Ac-Ag-Ac* est directement proportionnelle à la concentration de l’Ag à doser