Club technique - Immunohistochimie

Question 1

Nommer deux classes principales des marqueurs immunohistochimiques :

Answer 1

• Diagnostiques (classe I)

- Prédictifs (classe II)

Question 2

Nommer 7 1. indications utilités des marqueurs immunohistochimiques

Answer 2

A. Diagnostic / Classification
B. Détection de l’invasion
C. Détection de micrométastases
D. Facteur pronostique
E. Facteur prédictif de la réponse thérapeutique
F. Identification de microorganismes
G. Identification de matériel extracellulaire

Question 3

Expliquer la différence entre les anticorps monoclonaux et polyclonaux

Answer 3

Monoclonaux : anticorps identiques, dirigés contre un même déterminant antigénique, produits par des plasmocytes qui proviennent tous de la même cellule mère
Polyclonaux : mélange hétérogène d’anticorps, disponibles sous forme de sérum, qui reconnaissent des déterminants antigéniques ou des antigènes différents, avec des spécificités et des affinités qui varient. Ils sont générés par des clones différents de plasmocytes.

Question 4

Expliquer la différence entre antigène et épitope (déterminant antigénique) :

Answer 4

Antigène- molécule qui induit une réaction immune, qui pourrait contenir multiples épitopes différents et donc, évoque la production d’anticorps par les plasmocytes des clones différents.
Épitope-portion d’antigène reconnue par l’anticorps d’un clone unique.

Question 5

Nommer 2 enzymes utilisés dans immunohistochimie :

Answer 5

Peroxydase

Phosphatase alcaline

Question 6

Expliquer le mécanisme de récupération d’un antigène :

Answer 6

Brise des ponts de méthylène causés par la fixation réouvre l’accès aux anticorps

Question 7

Nommer deux méthodes de récupération d’un antigène (antigen retrieval) :

Answer 7

• Récupération d’antigène induite par la chaleur

- Récupération d’antigène induite par la protéolyse

Question 8

Donner les 3 exemples de blocages dans immunohistochimie

Answer 8

• Blocage de enzymes endogènes
• Blocage de la biotine endogène
• Blocage des sites de liaison non-spécifique

Question 9

Donner 3 éléments ou paramètres importants optimisés dans le protocole d’immunohistochimie:

Answer 9

• Choix d’anticorps
• Incorporation de démasquage
• Dilution des anticorps (primaires et secondaire)
• Durée d’incubation

Question 10

Nommer 3 exemples de référence utilisées dans la validation d’un test immunohistochimique

Answer 10

i. Validation orthogonale : contre un autre test utilisant le principe non-immunohistochimique.
(Exemple : validation du test immunohistohimique pour la protéine ALK contre le test FISH.)
ii. Validation contre le test d’un centre de référence.
iii. Validation avec le tissu dont antigénicité est connue en raison du contexte clinique (syndrome avec mutation germinale du gène).

Question 11

Nommer 4 mesures de performance d’un test :

Answer 11

Sensibilité
Spécificité
Concordance
Reproductibilité

Question 12

Donner un seuil de concordance avec test de comparaison exigé dans la validation clinique

Answer 12

90%

Question 13

Donner nombre de témoins à tester dans la validation clinique pour les nouveaux marqueurs qui ne sont pas utilisés comme prédicteurs de réponse thérapeutique

Answer 13

Dix témoins positifs et dix témoins négatifs

Question 14

Donner nombre de témoins à tester dans la validation clinique pour les nouveaux marqueurs qui sont utilisés comme prédicteurs de réponse thérapeutique

Answer 14

20 témoins positifs et 20 témoins négatifs

Question 15

Donner nombre de témoins à tester lorsqu’un nouveau clone est utilisé

Answer 15

10 témoins positifs et 10 témoins négatifs (pour les marqueurs classe I); 20 témoins positifs et 20 témoins négatifs (pour les marqueurs classe II)

Question 16

Donner nombre de témoins à tester lorsqu’un nouveau lot est utilisé

Answer 16

Un témoin positif et un témoin négatif devrait être testé

Question 17

Donner nombre de témoins à tester lors d’un changement de variable concernant l’anticorps (nouvelle compagnie, nouvelle dilution, durée d’incubation, durée de récupération d’antigène)

Answer 17

Deux témoins positifs et deux témoins négatifs