Club technique - Immunofluorescence Flashcards
Qu’est-ce que le déplacement de Stokes (“Stokes shift”)?
Différence en longueur d’onde entre la position du pic du spectre d’absorption (excitation) et celle du pic du spectre de luminescence (émission)
Quelle est la différence entre la fluorescence et la phosphorescence?
Pour la fluorescence, l’émission est très rapide, tandis que pour la phosphorescence l’émission de lumière continue après le retrait de la source lumineuse (pendant quelques millisecondes à minutes).
Pourquoi faut-il un déplacement de Stokes (Stokes shift) suffisamment grand?
Pour pouvoir séparer les longueurs d’onde d’excitation et d’émission avec des filtres
Nommer deux avantages de l’immunofluorescence par rapport à l’immunohistochimie
1) Antigènes plus accessible (pas d’étape de démasquage)
2) Moins de bruit de fond pour le parenchyme rénal
Nommer trois désavantages de l’immunofluorescence
1) Perte de signal avec le temps
2) Nécessite du tissu congelé (la plupart du temps)
3) Difficile d’examiner le reste du tissu
Nommer cinq propriétés idéales d’un fluorophore
1) Bonne photostabilité
2) Intensité d’émission élevée (“brillance”)
3) Spectre d’émission détectable avec les filtres disponibles
4) Longueur d’onde d’excitation disponible sur la lampe
5) Non-altéré par la conjugaison avec l’antigène ni par l’environnement
Quelle est la couleur observée de la fluorescéine?
Vert (518 nm)
Quelle est la couleur observée du Texas Red?
Rouge (580 nm)
Pourquoi utilise-t-on des tissus congelés non-fixés?
Pour éviter de dénaturer l’antigène car il est chimiquement sensible
Dans quel milieu doit-on mettre le spécimen si celui-ci ne sera pas congelé avant plusieurs heures?
Beno-Michel
Quelle est la durée maximale qu’on peut laisser un spécimen dans le Beno-Michel?
10 jours
À quoi servent les 3 échantillons d’une biopsie rénale?
1) Immunofluorescence (5 mm)
2) HE
3) microscopie électronique (1 mm)
De quoi doit-on s’assurer lorsqu’on divise une biopsie rénale?
Avoir des glomérules sur chacun des échantillons
Nommer trois causes de faux positifs pour la technique indirecte
1) Rinçage de l’anticorps inadéquat
2) Temps d’incubation trop long
3) Blocage inadéquat de la biotine intrinsèque
Comment fait-on le contrôle négatif pour la technique indirecte?
Mêmes étapes que le spécimen mais sans l’anticorps primaire (on met seulement l’anticorps secondaire)
Quel est le principe du “salt split”
Crée une séparation dermoépidermique artificielle au niveau de la lamina lucida
Quelle est l’utilité du “salt split”?
Distinguer la pemphygoïde bulleuse (patron «roof) de l’épidermolyse bulleuse acquise (patron «floor»)
Nommer deux façon de minimiser le photoblanchiment
1) Diminuer l’exposition à la lumière d’excitation (en durée et en intensité)
2) Utiliser une moins grande concentration de fluorophore mais qui a une efficacité (intensité) plus élevée
Qu’est-ce que l’autofluorescence?
Propriété de certains tissus d’émettre une fluorescence intrinsèque naturelle ou secondaire à la fixation (aldéhydes)
Nommer une cause secondaire d’autofluorescence et un moyen de la minimiser
- Fixation avec des aldéhydes
- Lavage avec du sodium borohydride 0.1% dans du PBS
Nommer 3 applications en pathologie du phénomène de fluorescence seule sans immuno
1) Thioflavine T (amyloïdose)
2) Auramine-Rhodamine (mycobactéries)
3) Rouge congo (amyloïdose)
Nommer 3 éléments à décrire lors de l’évaluation de l’IF d’une biopsie rénale pour une maladie glomérulaire
1) La structure marquée (glomérulaire, mésangiale, vasculaire)
2) Le patron du marquage (linéaire, granulaire, en bandes)
3) L’intensité du marquage
Nommer deux exemples d’antigène qui utilise la méthode indirecte (pour les maladies rénales)
C4d
PLA2R
Nommer un antigène pour lequel on utilise du tissu fixé en paraffine
PLA2R
