Club technique - Immunofluorescence

Question 1

Qu’est-ce que le déplacement de Stokes (“Stokes shift”)?

Answer 1

Différence en longueur d’onde entre la position du pic du spectre d’absorption (excitation) et celle du pic du spectre de luminescence (émission)

Question 2

Quelle est la différence entre la fluorescence et la phosphorescence?

Answer 2

Pour la fluorescence, l’émission est très rapide, tandis que pour la phosphorescence l’émission de lumière continue après le retrait de la source lumineuse (pendant quelques millisecondes à minutes).

Question 3

Pourquoi faut-il un déplacement de Stokes (Stokes shift) suffisamment grand?

Answer 3

Pour pouvoir séparer les longueurs d’onde d’excitation et d’émission avec des filtres

Question 4

Nommer deux avantages de l’immunofluorescence par rapport à l’immunohistochimie

Answer 4

1) Antigènes plus accessible (pas d’étape de démasquage)

2) Moins de bruit de fond pour le parenchyme rénal

Question 5

Nommer trois désavantages de l’immunofluorescence

Answer 5

1) Perte de signal avec le temps
2) Nécessite du tissu congelé (la plupart du temps)
3) Difficile d’examiner le reste du tissu

Question 6

Nommer cinq propriétés idéales d’un fluorophore

Answer 6

1) Bonne photostabilité
2) Intensité d’émission élevée (“brillance”)
3) Spectre d’émission détectable avec les filtres disponibles
4) Longueur d’onde d’excitation disponible sur la lampe
5) Non-altéré par la conjugaison avec l’antigène ni par l’environnement

Question 7

Quelle est la couleur observée de la fluorescéine?

Answer 7

Vert (518 nm)

Question 8

Quelle est la couleur observée du Texas Red?

Answer 8

Rouge (580 nm)

Question 9

Pourquoi utilise-t-on des tissus congelés non-fixés?

Answer 9

Pour éviter de dénaturer l’antigène car il est chimiquement sensible

Question 10

Dans quel milieu doit-on mettre le spécimen si celui-ci ne sera pas congelé avant plusieurs heures?

Answer 10

Beno-Michel

Question 11

Quelle est la durée maximale qu’on peut laisser un spécimen dans le Beno-Michel?

Answer 11

10 jours

Question 12

À quoi servent les 3 échantillons d’une biopsie rénale?

Answer 12

1) Immunofluorescence (5 mm)
2) HE
3) microscopie électronique (1 mm)

Question 13

De quoi doit-on s’assurer lorsqu’on divise une biopsie rénale?

Answer 13

Avoir des glomérules sur chacun des échantillons

Question 14

Nommer trois causes de faux positifs pour la technique indirecte

Answer 14

1) Rinçage de l’anticorps inadéquat
2) Temps d’incubation trop long
3) Blocage inadéquat de la biotine intrinsèque

Question 15

Comment fait-on le contrôle négatif pour la technique indirecte?

Answer 15

Mêmes étapes que le spécimen mais sans l’anticorps primaire (on met seulement l’anticorps secondaire)

Question 16

Quel est le principe du “salt split”

Answer 16

Crée une séparation dermoépidermique artificielle au niveau de la lamina lucida

Question 17

Quelle est l’utilité du “salt split”?

Answer 17

Distinguer la pemphygoïde bulleuse (patron «roof) de l’épidermolyse bulleuse acquise (patron «floor»)

Question 18

Nommer deux façon de minimiser le photoblanchiment

Answer 18

1) Diminuer l’exposition à la lumière d’excitation (en durée et en intensité)
2) Utiliser une moins grande concentration de fluorophore mais qui a une efficacité (intensité) plus élevée

Question 19

Qu’est-ce que l’autofluorescence?

Answer 19

Propriété de certains tissus d’émettre une fluorescence intrinsèque naturelle ou secondaire à la fixation (aldéhydes)

Question 20

Nommer une cause secondaire d’autofluorescence et un moyen de la minimiser

Answer 20

• Fixation avec des aldéhydes

- Lavage avec du sodium borohydride 0.1% dans du PBS

Question 21

Nommer 3 applications en pathologie du phénomène de fluorescence seule sans immuno

Answer 21

1) Thioflavine T (amyloïdose)
2) Auramine-Rhodamine (mycobactéries)
3) Rouge congo (amyloïdose)

Question 22

Nommer 3 éléments à décrire lors de l’évaluation de l’IF d’une biopsie rénale pour une maladie glomérulaire

Answer 22

1) La structure marquée (glomérulaire, mésangiale, vasculaire)
2) Le patron du marquage (linéaire, granulaire, en bandes)
3) L’intensité du marquage

Question 23

Nommer deux exemples d’antigène qui utilise la méthode indirecte (pour les maladies rénales)

Answer 23

C4d

PLA2R

Question 24

Nommer un antigène pour lequel on utilise du tissu fixé en paraffine

Answer 24

PLA2R