Cinétique pré-stationnaire Flashcards
Que faut-il faire afin de pouvoir étudier chacune des étapes du mécanisme réactionnel?
- Séparer autant que possible les étapes les unes des autres. Par exemple, afin de déterminer lesconstantes k1
et k-1 pour la liaison du substrat, on pourrait omettre un cofacteur requis pour la catalyse. Donc seules les réactions de liaison et de dissociation du substrats seraient mesurées. * S’assurer que l’enzyme ne pourra effectuer qu’un cycle de réaction catalytique. Par exemple, en ne fournissant un substrat qu’à une concentration équimolaire par rapport à l’enzyme.
Quelles sont les contraintes de la cinétique pré-stationnaire?
-demande de l’équipement spécialisé
- Requiert beaucoup d’enzyme
Quelles sont les deux grandes catégories d’appareils qui permettent de contrôler avec précision les conditions de départ et d’arrêt?
- Ceux qui impliquent le mélange de réactifs
Mélangeur à flux continu, mélangeur à flux arrêté et mélangeur à flux étanché - Ceux qui exploitent des méthodes de relaxation
Photolyse laser, saut de température, saut de précision, saut de pH
Quelles sont les différentes parties d’un appareil qui impliquent un mélange de réactif?
un mélangeur auquel sont couplées des seringues contenant les solutions à mélanger
un système de détection du signal
Par quoi sont limité les appareil qui implique un mélange de réactif?
Quelle échelle de temps pour les réactions?
Temps nécessaire pour mélanger les réactifs et arrêter le débit des solution
> 1 milliseconde donc constante de vitesse inférieure à 1000s-1
Pour quoi est encore utile le mélangeur à flux continu?
encore utile aujourd’hui pour certaines expériences qui demandent la détection par un signal autre que la spectroscopie d’absorbance ou de fluorescence.
En quoi se distingue le mélangeur à flux arrêter du mélangeur à flux continu?
Une faible quantité de réactif est nécessaire
Comment fonctionne le mélangeur à flux arrêter?
Les réactifs, de chaque seringue, sont poussés rapidement par un piston pneumatique vers une zone de mélange. Les liquides mélangés sont ensuite envoyés dans une chambre d’observation reliée à un système de détection spectrophotométrique. Cette chambre d’observation est connectée via une tubulure à une seringue d’arrêt, qui, lorsqu’elle est remplie, arrête le débit des solutions et démarre la collecte des données. La détection du signal ne démarre donc que lorsque le débit est arrêté.
Quel est le temps mort du mélangeur à flux continu?
À flux arrêter?
1-0.1 millisec
1-2 millisec
Comment fonctionne le mélangeur à flux étanché?
Les réactifs sont mélanger pour débuter la réaction puis ils sont arrêter par l’injection d’un troisième réactif
Que permet le mélangeur à flux étanché de plus que les autres mélangeurs?
La récupération d’aliquotes pour l’analyse subséquente par d’autres méthodes
Par quoi est contrôler le délai entre le début de la réaction et l’arrêt de celle-ci?
la longueur de la tubulure qui connecte ce des points de mélange
comment fonctionne la photolyse laser?
La réaction peut débuter en exposant les réactifs qui sont à l’équilibre à un pulse lumineux intense.
Suite à la perturbation, le retour à l’équilibre est suivi dans le temps. C’est cette réaction qui est mesurée
Comment fonctionne le saut de température?
Un échantillon à l’équilibre est perturber par un arc électrique puissant mais de courte durée La cinétique de retour à l’équilibre est mesurée
