Chapitre 4.2 Flashcards
c’est quoi les souris KO
souris chez lesquelles un gène spécifique est inactivé
à quoi servent les souris KO
à étudier le développement des mammifères, leur comportement et leur physiologie
c’est quoi la 1ere étape pour former les souris KO
construction d’ADN avec un allèle inactivé d’un gène cible qui est introduit dans des cellules souches embryonnaires
quel mécanisme est utilisé pour l’insertion de séquence semblable pour produire des modèles KO
mécanisme naturel de recombinaison homologue cellulaire
de quelle manière l’ADN est introduit dans les cellules embryonnaires ? (quel type de recombinaison)
recombinaison homologue pour une petite portion et recombinaison non-homologue pour la grande majorité (non-voulu)
comment sélectionner les cellules embryonnaires qui ont eu une insertion homologue de l’ADN recombinant
avec 2 gènes marqueurs sélectionnables (usually Néo r et tk s) sans région promotrice. seules les cellules avec recombinaison homologue vont survivre à présence de G-418 ET gancyclovir
c’est quoi la différence entre une recombinaison homologue et non-homologue?
homologue= il y a une séquence semblable du gène X aux extrémités dans la séquence de Néor. gène X est remplacé par Néor et ainsi DÉSACTIVÉ
non-homologue: gène Néoret tk s s’insert à une place aléatoire et non dans gène X. Pas d’inactivation du gène X
c’est quoi la 2eme étape pour créer les souris KO après inactivation d’une allèle dans les cellules embryonnaires
on injecte les cellules ES hétérozygotes pour le gène X (1 allèle inactivée) dans des embryons de souris.
Embryons sont transportés dans une souris femelle et les descendants contiennent des tissus dérivés des cellules ES transplantés et cellules de l’hôte
c’est quoi une souris chimère
souris qui contient 2 types de cellules qui sont génétiquement différents. Par exemple les souris knockout sont des cellules avec KO de X et cellules WT
3eme étape de création des souris KO après la naissance des souris chimères
croissement entre les souris hétérozygotes pour avoir homozygote KO (on veut X-/X-;A/A)
c’est quoi le principe de base derièrre CRISPR
CRISPR agit comme un outil de modification précise de l’ADN en ciblant des séquences spécifiques, permettant de couper et de modifier des gènes précisément. Cela peut corriger des mutations génétiques, étudier le rôle des gènes et développer de nouvelles thérapies médicales.
4 méthodes pour causer une perte de fonction d’une gène
1)inhibiteur spécifique
2)protéines recombinantes avec fonctions atténués
3)mutation des régions régulatrices ou codantes (KO ou CRISPR)
4)systèmes represseurs d’expression de gène
3 types d’expression de protéines recombinantes pour avoir un gain de fonction d’un gène
1) expression exogène (surexpression de la protéine)
2) ectopique (dans un environnement inconnu à la protéine)
3) endogène (souris mutante, changement de promoteur)
5 systèmes de supression de gène
1)antisens (ADNsb)
2) Decoy (ADNdb)
3) triple hélice
4) ARN interférant (RNAi)
5) ribozyme
3 systèmes constitutifs et inductibles
1) promoteur viral constitutif (CMV, S-40+Ac grand-T)
2) promoteur eucaryotique (beta-actine)
3) promoteur inductible (beta-gal, tétracycline)
