Chapitre 2.1-enzymes de restriction

Question 1

c’est quoi l’ADN recombinant

Answer 1

toute molécule d’ADN qui contient des séquences qui proviennent de différentes origines

Question 2

c’est quoi une protéine recombinante ou l’ARN recombinant

Answer 2

protéine ou ARN derivée de l’ADN recombinant

Question 3

c’est quoi un vecteur d’ADN

Answer 3

une molécule composée d’acide nucléique (habituellement circulaire) qui est capable de se repliquer dans une cellule hôte

Question 4

c’est quoi un insert

Answer 4

une molécule d’ADN recombinant qui est inserée dans le vecteur

Question 5

la fréquence de duplication d’ADN recombinant dépende de 3 choses. Nomme-les

Answer 5

1) type de cellule hôte
2) niveau d’activité de la cellule hôte
3) type du promoteur sur le vecteur d’ADN

Question 6

c’est quoi les 6 étapes du clonage d’ADN

Answer 6

1) construction du vecteur+insert
2)transformation de bactérie competente (réplication et production d’ADN)
3) purification et séquencage de l’insert
4) insertion de l’ADN dans le modèle cellulaire à l’étude
5) expression de la protéine recombinante
6)analyse biochimique et cellulaire

Question 7

la manipulation génétique des molécules d’ADN est possible grâce à ces 2 enzymes recombinantes purifiées:

Answer 7

enzymes de restriction et les ADN ligases

Question 8

c’est quoi un enzyme de restriction

Answer 8

endonucléases produites par les bactéries qui reconnaisent des séquences spécifiques de 4-18pb (sites de restrictions)

Question 9

quel lien les enzymes de restriction sont capables de cliver et quel est le resultat de ce clivage

Answer 9

elles clivent un lien phosphodiester et generent un 3’hydroxyle et 5’phosphate

Question 10

c’est quoi une enzyme de modification

Answer 10

une enzyme produite par les bactéries qui sert à ajouter un groupement methyl à 1-2 bases dans les sites de restrictions pour proteger l’ADN bactérien contre les enzymes de restriction en détruisant l’ADN étranger entrant par un virus/autre bactérie

Question 11

c’est quoi les 4 types d’enzymes de restriction

Answer 11

type I, II, III, et IV

Question 12

caractéristiques des enzymes de restriction de type I et III

Answer 12

reconnaisent séquence d’ADN spécifique et coupe à un endroit aléatoire éloigné du site reconnu

Question 13

caractéristiques des enzymes de restriction de type II

Answer 13

il y a 3 sous catégories (2, 2a, 2b) et elles sont les plus utilisées. Elles reconnaissent une séquence spécifique et coupent à un endroit spécifique

Question 14

Caractéristiques pour chacune des sous catégories pour les enzymes de restriction de type II

Answer 14

2-reconnais et coupe un site palindromique spécifique
2a-reconnais séquence non palindromique et coupe à l’extérieur du site de reconnaissance
2b-coupe à chaque extremité (3’ et 5’) du site de restriction

Question 15

Caractéristiques pour les enzymes de restriction de type IV

Answer 15

ciblent seulement les ADN methylés

Question 16

c’est quoi un overhang

Answer 16

une extrémité simple brin débordante après la génération des sticky end (bouts collants). Peut se faire en 3’ ou 5’

Question 17

c’est quoi la spécificité d’appariement pour les sticky ends

Answer 17

peuvent seulement s’associer avec d’autres sticky ends coupés par la même enzyme. Appariement très spécifique

Question 18

c’est quoi les blunt ends

Answer 18

des coupures au même endroit sur les 2 brins d’ADN qui generent aucun overhang

Question 19

c’est quoi la spécificité des appariements pour les blunt ends

Answer 19

ils peuvent s’associer avec n’importe quelle autre séquence de blunt ends (même si c’était coupé par un autre enzyme )

Question 20

c’est quoi les fragements de restriction

Answer 20

fragements generés après le clivage reproductible par les enzymes de restriction

Question 21

c’est quoi une carte de restrictions

Answer 21

une carte qui donne l’ordre et la fréquence des sites de restriction et la taille des fragements produits

Question 22

Comment créer une carte de restriction avec 2 enzymes différentes

Answer 22

on fait une digestion simple par chacune des enzymes et on voit les fragements générés. Ensuite, on effectue une double digestion poour voir l’ordre du clivage par ces 2 enzymes

Question 23

le nombre de coupures par les enzymes de restriction dépendent de 2 choses:

Answer 23

le nombre de nucléotides dans le site de restriction et le % en G et C

Question 24

comment calculer la taille moyenne des fragements générés par une enzyme de restriction

Answer 24

on multiplie les probabilities d’avoir le nucléotide voulu pour chaque base dans la séquence de restriction. si c’est 25% d’avoir G/A/T/C on utilise la formule (1/4)^n ou n=nombre de nucléotides dans le site de restriction