Ch 10 Flashcards
Les anticorps qui réagissent avec leur antigène passent d’une phase soluble à une phase solide. en quoi utilise t’on ce phénomène lors d’immuno essais
Cela permet de séparer et purifier les anticorps/antigènes qui intéragissent ensemble en retirant par lavage la phase soluble
Garder en tête lors d’un immuno-essai: quelle est la phase soluble/quelle est la phase solide.
Rate this 3-4 jusqu’à temps que sa soit bien compris
comment fonctionne un immunoessai par compétition
on lie des AC spécifiques dans deux tubes différents
Dans le premier tube, on ajoute une quantité fixe d’AG radioactif, on lave puis on mesure la radioactivité
Dans le deuxiè`me tube, on met la quantité fixe d’AG radioactif mais aussi des concentration croissantes d’AG froid (non radioactif) puis on mesure la radioactivité après lavage selon la concentration d’AG froid
Qu’est ce qu’un antigène froid
c’est un antigène qui n’est pas marqué par radioactivité ou par fluorescence
à quoi peut servir un immunoessai par compétition
à établir une courbe d’étalonnage de radioactivité pour une C fixe d’AG radioactif
on peut doser le sérum d’AG d’un patient avec cette courbe d’étalonnage
comment fonctionne le test d’immunoprécipitation par hémagglutination
on met des globules rouges dans un puit.
Si les globules intéragissent avec l’AC, les GR vont tapisser le fond du puit et forment une couche rouge dans le fond du puit.
Si les GR n’intéragissent pas, ils forment un ama au centre du puit. il n’y a qu’un point rouge au fond du puit
qu’est ce que le titre de l’antisérum dans une hémagglutination
c’est la dernière dilution d’un antigène qui donne encore un résultat positif dans le test d’hémagglutination
le titre est donné comme l’inverse de la dilution (EX: titre est la dilution 1:30 donc le titre sera de 30)
J’utilise des billes d’agaroses ou magnétiques couvertes d’anticorps spécifiques à une protéine qui se retrouve dans un mélange. J’isole les billes pour extraire la protéine spécifique
COMMENT S’APPEL CET TECHNIQUE
L’immunoprécipitation par billes d’agarose/magnétique
qu’est ce que l’immunofluorescence?
c’est le couplage de fluorophore à des anticorps
comment fonctionne la cytométrie de flux
des cellules sont marquées avec des AC fluorescent puis passé dans un flux où il y a un laser
Le laser excite les fluorophores et des détecteurs envoient un signal pour chaque fluorophore d’une certaine couleur qui passe au travers du laser
Les résultats d’une cytométrie de flux peuvent prendre plus d’une forme. quel est l’avantage du dot blot?
Le dot blot a 2 axes. on peut donc analyser les cellules présentes selon deux paramètres
Les résultats d’une cytométrie de flux peuvent prendre plus d’une forme. quel est l’avantage d’un histogramme
Un histogramme est une courbe qui inclu le nombre de point pour un paramètre. on peut calculer gràce à l’aire sous la courbe le nombre exact de cellules analysées
en quoi le test ELISA est il différent d’un test par immunofluorescence
ELISA (Enzynme Linked ImmunoSorbent Assay) utilise une enzyme qui forme un prouit coloré plutot qu’un fluorophore excitable
est ce qu’un test ELISA fait sur le sérum d’un patient infecté va détecter l’antigène dans le sérum?
non, le test détecte la présence d’anticorps contre l’antigène dans le sérum.
Quelles sont les étapes d’un test ELISA
on colle l’AG d’intêret dans un puit puis
On couvre le puit avec une protéine de blockage inerte puis on lave
On ajoute le sérum d’intêret puis on lave
on ajoute l’anticorps secondaire marqué anti-anticorps qui se trouvait dans le sérum puis on lave
on ajoute le substart pour l’enzyme portée sur l’AC secondaire
quelle est la différence entre un ELISA et un ELISA sandwich
Un sandwich nécessite deux AC différents. un premier qui est fixé sur la plaque qui reconnait un premier anticorps
le deuxième anticorps reconnaite un autre épitope sur l’AG et est marqué avec une enzyme
Quelles sont les avantages de l’ELISA sandwich par rapport au ELISA
un ELISA a besoin d’avoir une bonne quantité de l’AG purifié pour tapisser le fond du puit.
le ELISA sandwich n’a pas besoin d’avoir l’AG purifié.
quel est le désavantage de l’ELISA sandwich par rapport à un ELISA normal
Il requiert deux types d’AC monoclonaux particulier contre l’AG. c’est donc plus cher que d’utiliser un AC spécifique et un AC anti-AC commercial
en quoi consiste un ‘‘Bead arrays’’
c’est une analyse qui consiste d’une multitudes de test ELISA qui utilisent chaqun des anticorps à spécificité différentes.
Les AC d’un même type sont tous fixés sur une même population de billes et on peut retrouver plusieurs populations de billes dans une analyse
Quelle est l’utilité d’un Bead array?
on peut faire une multitude de test ELISA sur un seul échantillon de sérum.
donner un exemple de dip stick assay (ou lateral flow)
les tests de grossesse
comment fonctionne un dip stick assay
exemple du test de grossesse
L’urine contient une hormone qui est captée par un anticorps marqué avec un colorant
Le combo hormone-Ac passe ensuite sur deux bandes d’AC
La première bande est un AC anti-hormone et la deuxième bande est un AC anti-AC marqué
La première bande agit comme un ELISA sandwich et se colore si l’hormone est présente
la deuxième bande sert à vérifier que l’anticorps marqué est bien présent dans l’analyse
peut on faire un dip stick assay sans le principe d’ELISA sandwich, c’est à dire sous forme d’ELISA ordinaire.
Comment faudrait il préparer le test
Oui. on remplace les AC sur la première bande par un AG qui doit se lier à l’anticorps dont on veut prouver la présence
à quoi ressemble le test Latex Agglutination Test
il est très semblable à l’hémagglutination mais il se fait sur des billes de latex couplées à l’antigène.
quels sont les avantages/ desavantages du latex agglutination test
Désavantage: il est peu sensible
Avantage; il est rapide, robuste et très simple et peu être réalisé dans un hopital de brousses
