Bakteriologia - kurs rozszerzony Flashcards
mikroorganizmy (definicja)
to jednokomórkowe organizmy widoczne pod mikroskopem
formy niejednokomórkowe zaliczane do drobnoustrojów to.. (3)
- wirusy
- priony
- mobilne elementy genetyczne
Grupy drobnoustrojów (4) i ich przykłady
- prokariotyczne - bakterie, archeony
- eukariotyczne - mikroskopijne grzyby (pleśnie, drożdże, drożdżopodobne), śluzorośla (ameboidalne)
- protista - glony, pierwotniaki
- wirusy
wirusy (charakterystyka - 11)
- małe organizmy
- proste struktury
- genom to DNA lub RNA
- występują białka strukturalne i wyjątkowo enzymy
- brak aktywności metabolicznej
- zależne od żywicieli
- swoistość i specyficzność
- reprodukcja tylko w żywych komórkach
- patogeny
- fagi drobnoustrojów (pozytywny aspekt) - np. bakteriofagi, algofagi, wirofagi, fungifagi
- to ustroje skrajnie pasożytnicze, które powstały na drodze ewolucji degeneratywnej - nastąpiła redukcja genów i zdolności do bycia samodzielną komórką
Mikroby (występowanie)
Występują wszędzie - w środowiskach wodnych, lądowych, w powietrzu (ale jest to środowisko przejściowe służące jako miejsce transportu) oraz kolonizują żywicieli.
Endolity (charakterystyka - 4)
- to skalne pokłady obfitujące w mikroby
- to obecność żywych układów drobnoustrojów w skałach i ich szczelinach lub porach, w których znajduje się woda
- głównie występują grzyby pleśniowe, drożdże, drożdżopodobne, bakterie i archeony
- np. Bacillus infernus - hipertermofil, 20m-2,8km pod ziemią
rozmiary mikroorganizmów
0,1 mikrona - 500 mikronów
Wyjątek:
- olbrzymy > 0,7 mm
np. Epulopiscium fishelsoni, Thiomargarita namibiensis - nanoby - najmniejsze
nanoby (charakterystyka - 12)
- najmniejsze z drobnoustrojów: 0,01-0,6 mikronów
- określane jako ultramikroby, nanoformy, wapniejące nanocząstki, nanoby
- ich transmisja jest szybka i łatwa - odbywa się za pośrednictwem powietrza, asteroid, międzygwiezdnego pyłu, kurzu, chmur.
- wykazują wysoką tolerancję na czynniki antymikrobiologiczne, środowiskowe
- wykazują wolny metabolizm i wzrost - czas generacji to 3 dni
- w hodowlach tkankowych po 30 dniach pojawiają się w formie mlecznego biofilmu
- pleomorfizm
- budową zbliżone do Gram-ujemnych
- zdolne do przechodzenia przez filtry
- nieliczne wydzielają węglan apatytu
- chorobotwórcze dla ludzi i zwierząt - występuje latentność
- możliwy polimorfizm
nanoby (występowanie)
Powszechnie występują w glebie, wodzie, stratosferze, ekstremalnych środowiskach, galaktyce. Izoluje się je również z ludzi i zwierząt, ze ścieków i zanieczyszczonych wód.
nanoby (wymagania wzrostowe - 2)
- wysokie w warunkach in vitro
2. hodowle tkankowe lub komórkowe - surowica 37stC w 5% CO2 atmosferycznego
nanoby są oporne na… (3)
- wysuszenie i wysoką temperaturę
- promieniowanie UV
- środki dezynfekcyjne i antyseptyki
nanoby są wrażliwe na… (3)
- 3mR promieniowania jonizującego
- gotowanie przez 30 min
- chemioterapeutyki - tetracykliny i sulfonamidy
nanoby (chorobotwórczość - 5)
- kamica nerkowa - nerfotropizm
- wielotorbielowatość nerek
- choroby wzrostowe układu moczowo-płciowego
- choroby naczyniowo-sercowe
- powstawanie raka
nanoby uczestniczą w procesach takich jak… (3)
- procesy chorobotwórcze - miażdżyca tętnic, kamica miazgi zębowej, zapalenia przyzębia
- procesy geochemiczne - mineralizacja, skałotwórczość [mineralizacja, kalcyfikacja], glebotwórczość, korozja metali [rdzewienie żelaza, zielenienie miedzi, rozpuszczanie glinu], tworzenie kamienia kotłowego [niedrożność rur]
- procesy żywych organizmów - konstruowanie skorupek pierwotniaków, muszli mięczaków, skorupek jaj ptaków
nanoby (przykłady - 2)
- Nanoarchaeum equitans
2. Nanobacterium sanguineum
nanoby (przykład współżycia)
Ignicoccus spp.(archea) i Nanoarcheoum equitans (nanob)
- Ignicoccus spp. to termofilny autotrof (źródło energii z przemian H2 lub S), Gram-ujemny ziarniak, charakterystyczna ściana komórkowa, której błona zewnętrzna z dużą przestrzenią peryplazmatyczną
- Nanoarchaeum euitans to terfmofilny archeon, posiada zredukowany genom, występuje warstwa S na powierzchni i w peryplazmie pod błoną zewnętrzną, jego tryb życia wymaga żywiciela jako źródło energii i węgla - pasożyt lub interakcja symbiotyczna
etapy przeprowadzania badań (5)
- obserwacja i pytania
- hipoteza
- zaplanowanie doświadczenia
- powtórzenie eksperymentu
- odrzucenie, modyfikacja lub przyjęcie hipotezy
3 domeny w świecie żywym to…
- bakterie
- archea
- eukariota
Archaea [charakterystyka]
- Większość to beztlenowce, nieliczne halofile tlenowe
- Brak peptydoglikanu w ścianie komórkowej
- Zajmują ekstremalne środowiska np. jelito grube
3 główne grupy fizjologiczne Archaea
- Metanogeny (przeprowadzają syntezę metanu ze związków mineralnych m.in. CO2 i H2 (uboczny produkt metaboliczny innych bakterii – symbioza))
- Halofile (przetrwają w wysokich stopniach zasolenia np. oceany, solanki)
- Hipertermofile (wykrywane w gorących środowiskach, np. gejzery, podłoża wulkaniczne, hydrotermalne kominy dna oceanu)
przykłady Archaea [3]
- Methanosarcina barkeri
- Methanococcus janaschii
- Methanobacterium thermo
Od chwili pojawienia się na Ziemi organizmy komórkowe podlegają nieustannie ewolucji objawiającej się poprzez…
- selekcję
- zmienność rekombinacyjną i mutacje
współczesna eukariotyczna koncepcja gatunku [3]
- fenetyczna koncepcja (PhCS - pochodząca od wspólnego przodka, bazująca na cechach fenotypowych),
- ewolucyjna koncepcja (ECS - powstanie odrębnych taksonów rozdzielonych w czasie i przestrzeni),
- polifilogenetyczna (PCS – przeciwstawiająca się taksonomii linneuszowskiej)
Prokariotyczna koncepcja gatunku
- brak uniwersalnego systemu klasyfikacji prokariotów
- współcześnie: filogenetyczna koncepcja w oparciu o analizy informacji i struktur genetycznych oraz wyznaczania podobieństwa genetycznego (parametry: mol% GC, hybrydyzacja DNA-DNA, analiza rRNA)
zmienność genetyczna może nastąpić poprzez… [3]
- redukcję genomów - chlamydie, wirusy, riketsje
- przenoszenie plazmidów - HGT
- mutacje
Rodzaje transferów genów [2]
- HGT – Horyzontalny (lateralny) transfer genów
- Koniugacja – „proces płciowy”, dawca i biorca
- Transdukcja – za pośrednictwem bakteriofagów
- Transformacja – pobieranie wolnego DNA ze środowiska - Wertykalny (pionowy) transfer genów
współczesna klasyfikacja organizmów prokariotycznych [cechy]
- to taksonomia polifazowa - wielokierunkowa
- czerpie informacje z badań:
> fenotypowych - profil aktywności metabolicznej, cechy fizjologiczne, morfologiczne, wirulentność, oporność
> genomowych - informacje genetyczna (np. markery molekularne)
> filogenetycznych
genotyp to …
informacja genetyczna + fenotyp modyfikowany przez czynniki środowiska
fenotyp to…
rezultat interakcji genotypu z czynnikami środowiskowymi
techniki taksonomiczne [5]
- zawartość zasad G+C w DNA
- pierwszy marker taksonomiczny
- różnice większe od 10 mol% – organizmy nie należą do tego samego rodzaju
- różnice większe niż 5% – nie należą do tego samego gatunku - metody hybrydyzacja DNA/DNA
- niezbędna do wyznaczania granic gatunku bakteryjnego
- do 20% różnic w ułożeniu nukleotydów w gatunku - sekwencjonowanie kwasów nukleinowych – analiza podjednostek 16S rRNA, genów kodujących polimerazę RNA, gyrazę, syntetazę ATP, białka szoku cieplnego DnaK (homolog Hsp70), syntetazę glutaminy czy genów białka RecA
- analiza porównawcza fragmentów DNA
- Porównanie sekwencji w metodzie hybrydyzacji DNA-rRNA
analiza zawartości G+C w DNA
• dsDNA utworzony z komplementarnych par zasad G+C i A-T, a stosunek molarny G/C i A/T jest stały i zwykle wynosi 1
• względny stosunek zawartości molarności [G+C]/[A+T] jest różny
• pozwalają odróżnić szczepy z podobnym fenotypem
• zawartość G+C w DNA prokariontów mieści się w szerokich granicach 20-80 mol%
o niezależne od technik PCR,
o analiza całego genomu,
o metoda ilościowa,
o detekcja unikalnych gatunków
• marker nie wystarczający do opisania gatunku
za złoty standard w określaniu pozycji filogenetycznych / gatunkowej dla prokariontów uznaje się techniki
techniki wyznaczania stopnia podobieństwa/identyczności (homologiczności) całych genomów analizowanych ze sobą szczepów - hybrydyzacja DNA-DNA
• wykorzystuje się naturalne właściwości fizykochemiczne kwasów nukleinowych tj. zdolność do denaturacji i reasocjacji komplementarnych nici w podwójnej helisie DNA
• współczynnik RBR – względny stopień wiązania między nukleotydami
• współczynnik ∆Tm – różnica temperatur denaturacji termicznej w analizach porównawczych między szczepami
• Parametry RBR ∆Tm
- cechuje je wzajemna wysoka korelacja
- wzajemna transformacja niemożliwa
• Zalety parametru ∆Tm
- wartość zawsze taka sama
- zbędna obróbka danych surowych
• Rekomendacje: wartość hybrydyzacji DNA-DNA
- przy poziomie 70% i powyżej współczynnika RBR – duże pokrewieństwo między szczepami
- przy współczynniku ∆Tm ≤ 5oC oznacza bliskie pokrewieństwo genetyczne i można zaliczyć szczepy do tego samego taksonu
metody sekwencjonowania DNA [2]
o metoda terminacji łańcucha
o Metoda Maxama i Gilberta (chemiczna degradacja DNA)
alternatywne metody sekwencjonowania DNA oparte są na [3]
o Hybrydyzacji
o równoległej ligacji i rozszczepianiu
o Pirosekwencjonowaniu (sekwencjonowanie kwasów nukleinowych w czasie rzeczywistym) - Wyznakowane nukleotydy w momencie dołączania się do nici DNA uwalniany jest pirofosforan, którego ilość jest następnie zliczana
Metody typowania DNA
DNA fingerprinting, genetyczny odcisk palca, „Odcisk palca DNA”
- pozwalają wykryć wewnątrzgatunkowe różnice
- metody pierwszej generacji w oparciu o analizę restrykcyjnych fragmentów DNA całego genomu
- metody PCR z analizą z amplifikowanych fragmentów genomowego DNA
Analiza rRNA lub genów kodujących rRNA (rDNA)
• geny rRNA wysoce konserwatywne, fundamentalna rola rybosomów
• rRNA cząsteczki występujące, specyficzne o stałej funkcji
• rRNA doskonały marker w badaniach filogenetycznych
• różnice w strukturze pierwszorzędowej odzwierciedlają oddalenie ewolucyjne między organizmami
• badane 3 odmiany rRNA - 23S, 16S i 5S
• najlepiej przebadaną i opisaną molekułą jest 16S, najwięcej informacji
• powszechnie akceptuje się analizę 16S rRNA w badaniach taksonomicznych i filogenetycznych prokariotów w integracji z innymi technikami stosowanymi w polifazowej charakterystyce szczepów
• alternatywne molekuły: 23S rRNA, geny kodujące podjednostki ATPazy, czynniki elongacyjne i polimerazy RNA, białka szoku termicznego, chaperony
o Określenie stopnia pokrewieństwa pomiędzy szczepami powyżej poziomu gatunkowego;
o Umożliwia detekcję niehodowlanych szczepów in situ w próbie środowiskowej
o Analizę dystrybucji i rozmieszczenia szczepów w naturalnych habitatach
o Monitorowanie bioróżnorodności lub struktury mikrobiologicznej w środowiskach (tworząc wyznakowane sondy rRNA, metody pomiaru w czasie rzeczywistym )
3 techniki rekonstrukcji drzewa filogenetycznego
o Metody odległościowe (macierze odległości ewolucyjnych, prosty algorytm średnich połączeń UPGMA z analizą skupień sekwencji – algorytmy klastrujące)
o Metody maksymalnej parsymonii (szczepy w obrębie gatunku skojarzone ze zbiorami cech)
o Metody największej wiarygodności (największe prawdopodobieństwo powiązań ewolucyjnych między szczepami)
białka o wysoce konserwatywnych sekwencjach przydatne w ustalaniu filogenetycznych związków bakterii [7]
o białko szoku termicznego Hsp70 (białka opiekuńcze w warunkach stresowych)
o syntaza lanylo-RNA
o dehydrogenaza bursztynianowa – enzym oddechowy – cykl Krebsa
o hydroliza pirofosforanu – rozkład ATP
o czynniki elongacyjne
o białka rybosomalne L2, L5, 11 15
o gyrazy – białko bakteryjne, replikacja, transkrypcja, rekombinacja
Domena: Bacteria
- aparat jądrowy
- plazmidy
- ściana komórkowa
- lipidy w błonie
- białka histonowe
- rybosomy
- operony
- introny
- inicjatorowy tRNA
- Wrażliwość rybosomów na toksynę błoniczą
- Polimeraza RNA zależna od DNA
- Wrażliwość na rafampicynę
- Wrażliwość na chloramfenikol, streptomycynę i kanamycynę
- Czynniki transkrypcyjne
- Replikacja
- Metanogeneza
- Nitryfikacja
- Fotosynteza z udziałem chlorofilu
- patogeny
- Życie w warunkach ekstremalnych
- aparat jądrowy - nukleoid
- plazmidy - powszechne
- ściana komórkowa - mureina
- lipidy w błonie - Wiązania estrowe
- białka histonowe - Tylko histonopodobne
- rybosomy - 70S
- operony - obecne
- introny - t. w rRNA i pre-mRNA
- inicjatorowy tRNA - formylometionina
- Wrażliwość rybosomów na toksynę błoniczą - niewrażliwe
- Polimeraza RNA zależna od DNA - 1 (4 podjednostki)
- Wrażliwość na rafampicynę - wrażliwe
- Wrażliwość na chloramfenikol, streptomycynę i kanamycynę - wrażliwe
- Czynniki transkrypcyjne - niepotrzebne
- Replikacja - 1 punkt startowy
- Metanogeneza - Nie występuje
- Nitryfikacja - występuje
- Fotosynteza z udziałem chlorofilu - występuje
- patogeny - występują
- Życie w warunkach ekstremalnych - Mało powszechne
Domerna Archeae:
- aparat jądrowy
- plazmidy
- ściana komórkowa
- lipidy w błonie
- białka histonowe
- rybosomy
- operony
- inicjatorowy tRNA
- Wrażliwość rybosomów na toksynę błoniczą
- Polimeraza RNA zależna od DNA
- Wrażliwość na rafampicynę
- Wrażliwość na chloramfenikol, streptomycynę i kanamycynę
- Czynniki transkrypcyjne
- Replikacja
- Metanogeneza
- Nitryfikacja
- Fotosynteza z udziałem chlorofilu
- patogeny
- Życie w warunkach ekstremalnych
- aparat jądrowy - nukleoid
- plazmidy - powszechne
- ściana komórkowa - pseudomureina lub brak (brak kwasu muraminowego)
- lipidy w błonie - Wiązania eterowe (brak kwasów tłuszczowych, obecność izoprenoidy i hydroksyizoprenoidy)
- białka histonowe - obecne
- rybosomy - 70S
- operony - występują
- inicjatorowy tRNA - metionina
- Wrażliwość rybosomów na toksynę błoniczą - wrażliwe
- Polimeraza RNA zależna od DNA - Kilka (8-12 podjednostek)
- Wrażliwość na rafampicynę - niewrażliwe
- Wrażliwość na chloramfenikol, streptomycynę i kanamycynę - niewrażliwe
- Czynniki transkrypcyjne - wymagane
- Replikacja - Wiele punktów startowych
- Metanogeneza - występuje
- Nitryfikacja - występuje (1 organizm)
- Fotosynteza z udziałem chlorofilu - nie występuje
- patogeny - nie wykryto
- Życie w warunkach ekstremalnych - Powszechne (Halobacterium salinarum, Pyrolobus fumari)
Domena Eukarya
- aparat jądrowy
- plazmidy
- ściana komórkowa
- lipidy w błonie (wiązania)
- białka histonowe
- rybosomy
- operony
- introny
- inicjatorowy tRNA
- Wrażliwość rybosomów na toksynę błoniczą
- Polimeraza RNA zależna od DNA
- Wrażliwość na rafampicynę
- Wrażliwość na chloramfenikol, streptomycynę i kanamycynę
- Czynniki transkrypcyjne
- Replikacja
- Metanogeneza
- Nitryfikacja
- Fotosynteza z udziałem chlorofilu
- patogeny
- Życie w warunkach ekstremalnych
- aparat jądrowy - obłonione jądro
- plazmidy - rzadkie
- ściana komórkowa - Celuloza, chityna
- lipidy w błonie - Wiązania estrowe
- białka histonowe - obecne
- rybosomy - 80S i 70S
- operony - brak
- introny - obecne
- inicjatorowy tRNA - metionina
- Wrażliwość rybosomów na toksynę błoniczą - wrażliwe
- Polimeraza RNA zależna od DNA - 3 (wielko jednostkowe)
- Wrażliwość na rafampicynę - niewrażliwe
- Wrażliwość na chloramfenikol, streptomycynę i kanamycynę - niewrażliwe
- Czynniki transkrypcyjne - wymagane
- Replikacja - Wiele punktów startowych
- Metanogeneza - Nie występuje
- Nitryfikacja - Nie występuje
- Fotosynteza z udziałem chlorofilu - Występuje (chloroplasty)
- patogeny - Stosunkowo nieliczne
- Życie w warunkach ekstremalnych - rzadkie
4 dowody na 3 domeny życia
- typ i rodzaj ściany komórkowej – mureina, pseudomureina, celuloza, chityna (wyjątek grupa Planctomyces-Pirellla i Mycoplasma-Chlamydia, brak mureiny, kwasu muraminowego)
- rodzaj i układ lipidów – fosfolipidy i fytany/bifytany (wyjątek nieliczne ekstremofilne bakterie)
- rodzaje i ilość podjednostek polimerazy RNA
- mechanizmy syntezy białek – bakterie kodon start AUG, tRNA – zmodyfikowana metionina, rybosomy niewrażliwe na toksynę błoniczą, hamowanie biosyntezy białek przez antybiotyki
Metody fenotypowe
- obserwacje cech morfologicznych, fizjologicznych i wzrostowych izolatów
- testy fenotypowe - oznaczanie w metodach bezpośrednich lub pośrednich: aktywność enzymatyczną, profil wykorzystywania substratów, warunki wzrostowe i inne
- metody muszą być wystandaryzowane, jednolite i powtarzalne (szczepy referencyjne i wzorcowe jako punkt odniesienia; liczba analiz biochemiczno-enzymatycznych, liczba powtórzeń analiz, n liczba szczepów/izolatów blisko spokrewnionych; inokulacja, warunki inkubacji optymalne)
testy pomocnicze w identyfikacji szczepów za pomocą metod fenotypowych
o taksonomia numeryczna – systemy identyfikacji mikroorganizmów
- np. API, Biolog, Vitek, Feniks
- Wyniki są interpretowane komputerowo
- Dedykowane głównie dla diagnostyki klinicznej
o taksonomia dychotomiczna
- barwienie grama
- morfologia kolonii
- wzrost na rekomendowanych podłożach
o chemotaksonomia – użyteczne w identyfikacji i klasyfikacji prokariotów - specyficzne molekuły
• Komponenty ściany komórkowej (typ peptydoglikanu, kwasy tejchojowe)
• Lipidy (kwasy tłuszczowe, lipidy polarne, LPS, chinony)
• Poliaminy (związki polikationowe
2 metody klasyfikacji organizmów
• klucze dychotomiczne
o Powszechne w diagnostyce identyfikacyjnej
o w oparciu na obecności lub braku danej analizowanej cechy (fenotypowe, morfologiczne)
o Na zasadzie wykluczania
• kladogramy (klastryczna, analiza skupień)
o to mapy wskazujące na stopień pokrewieństwa pomiędzy organizmami w zestawieniu cech zbiorczych
o Analiza genetyczna (pokrewieństwo genetycznego za pomocą analizy rRNA)
o analiza chemotaksonomiczna (białka, lipidy, LPS, aa, cukrowce)
o analiza komputerowa (podobieństwo, pokrewieństwo i identyczność wyrażane w procentach)
Alternatywne metody typowania fenotypu [4]
• serotypowanie (zmienność antygenowa) – wykrywanie: rzęski, fimbrie, otoczki, białka ściany komórkowej, osłony
• profilowanie elektroforetyczne białek
- całkowite białka komórkowe, OMP bakterii Gram-ujemnych, analiza ML enzym elektroforeza
• analiza LPS metodami elektroforetycznymi (zmienność w części O-swoistego łańcucha bocznego)
• techniki spektrometryczne
Klasyfikacja organizmów prokariotycznych - 3 etapy
• obecnie badania taksonomiczne prowadzone są na trzech następujących po sobie poziomach
o metody posiewowe szczepów
metody fenotypowe – testy biochemiczne, fizjologiczne, analiza kwasów tłuszczowych, analiza DNA (badania polimorfizmu, PCR)
o ustalenie pozycji filogenetycznej – metody sekwencjonowania genu 16S rRNA
o ustalenie przynależności gatunkowej – metody hybrydyzacji DNA-DNA
system fenetyczny
zakłada grupowanie organizmów na podstawie podobieństwa zespołu cech ujawniających się fenotypowo
system filogenetyczny
uwzględnia najnowsze odkrycia dotyczące pokrewieństw ewolucyjnych (podstawą jest struktura DNA, ale obecnie również konserwatywne sekwencje zawierające insercje i delecje, geny kodujące białka)
Identyfikacja taksonomiczna mikroorganizmów
określenie przynależności badanego organizmu go odpowiedniej jednostki taksonomicznej, najczęściej gatunku
Gatunek to
- populacja mikroorganizmów wykazujących wysoki stopień podobieństwa w ściśle określonym zakresie cech, a różniących się od innych gatunków tego samego rodzaju
- to monofiletyczna grupa bakterii genomowo i fenotypowo spójna, którą można diagnozować na podstawie charakterystycznych cech fenotypowych
taksogatunek
grupa organizmów (szczepy, izolaty) z wysokim podobieństwem fenotypowym i tworzący odrębny klaster z charakterystycznym zestawem cech fenotypowych
genetyczny gatunek, genogatunek, genovar, grupa DNA
grupa organizmów z wysokim poziomem podobieństwa hybrydyzacji DNA-DNA
- różne genogatunki nie mogą być odróżniane od innych genogatunków na podstawie znanych cech fenotypowych
- Genogatunki pozostają bez nazwy taksonomicznej do momentu wykazania różnic w cechach fenotypowych
nomengatunek
grupa organizmów z nazewnictwem dwuczłonowym
Koncepcje gatunku dla organizmów prokariotycznych - 4
• fenetyczna/politetyczna koncepcja PhSC, sprowadza się do empirycznej analizy danych stabilnych cech fenotypowych (umowne operacyjne jednostki taksonomiczne, operational)
• ewolucyjna koncepcja gatunku, ESC – brak skamielin, brak informacji morfologicznych, genetycznych i fenotypowych ancestralnego przodka prokariotów
• filogenetyczna koncepcja gatunku PSC w 2 wariantach:
o monofiletyczna,
o diagnostyczna
• Monofiletyczna koncepcja gatunku
o zgrupowanie szczepów homologicznie spójnych ze sobą
o analiza sekwencji rRNA (16S rRNA w prokariotach) lub genów housekeeping (badanie autapomorfii/homologii między organizmami)
o sekwencje homologiczne i unikalne w taksonie, z wykluczeniem sekwencji wstawionych w genom z powodu HTG
Diagnostyczna koncepcja gatunku
- gatunek jako najmniejszy diagnostyczny klaster obejmujący również wzorzec cech powyżej poziomu taksonu, wspólnych w obrębie rodzaju, rodziny, rzędzie etc
- funkcjonalne jednostki diagnostyczne, diagnostic units (różne kryteria)
- klastry – genetyczne, fenotypowe, fizjologiczne, patogeniczności, serologiczne, fagospecyficzne