26. Mutációk hibajavítása (dark repair, light repair). A Lederberg-féle replika módszer és az Ames-teszt Flashcards

You may prefer our related Brainscape-certified flashcards:
1
Q

Fluktuációs teszt

A

Cél: Megállapítani, hogy a mutáció indukált vagy spontán

Például sztreptomicin elleni rezisztencia spontán vagy indukált módon jelenik meg
1. Lombikban szaporítjuk a sztreptomicinre érzékeny tenyészetet sztreptomicin nélküli tápközegben –> keverés után szélesztés agaros, sztreptomicint tartalmazó táptalajokon –> ha a telepek hamar megjellenek, valószínűleg spontán a mutáció, mivel korábban nem találkoztak sztreptomicinnel

  1. Egyértelmű eredményt ad: előszaporítást kémcsövekben végezzük, mindegyiket külön agarlemezre szélesztjük –> rezisztens telepek hamar kifejlődnek, de a telepszámok nagy fluktuációt mutatnak
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Lederberg-féle (bársony) replika módszer

A

Cél: Mutánsok izolálása a vad típusoktól (pl.: antibiotikumra rezisztensek, auxotrófok, kondícionális mutánsok)

  1. Egy tenyészetből sejtek szélesztése agarlemezre, néhány generációs inkubálás –> steril bársonylemezzel átoltjuk a fejlődő telepeket, replikát, lenyomatot képzünk egy második agarlemezen (pl.: antibiotikum tartalmú, antibiotikum rezisztencia esetén) –> a két agarlemezt néhány napig inkubáljuk egymás mellett –> a keresett mutáns telepet képez mindkét lemezen, a vad típus csak az elsőn
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Ames-teszt

A

Cél: Annak tesztelése, hogy egy adott kémiai anyag mutagén-e

  1. His-auxotróf szalmonella törzs szuszpenzióját minimál táptalajos agarlemezre szélesztjük –> telepképződés nem várható
  2. Az agarlemez közepébe egy lyukat fúrunk, ebbe a tesztelendő kémiai anyagot tesszük, ez a tápközegbe diffundál, ahol találkozik a baktériumokkal
  3. Ha a használt anyag mutagén –> a baktériumokban mutáció –> His-auxotróf törzsek ilyenkor revertálnak: visszaalakulnak prototróf törzsekké –> ezek már telepet képezehetnek a minimál táptalajon
  4. Minél több telep képződik, annál mutagénebb az anyag (ha nem mutagén, egy sem keletkezik) –> fontos tudni ezt, mert a mutagén anyagok általában karcinogének is (daganatot okoznak) –> (munka- és egészségvédelmi szempontból jelentős)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Plazmidok típusai

A
  1. F-plazmid
  2. R-plazmid
  3. Virulencia plazmidok
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

F-plazmid

A

A baktériumsejtek konjugációja során az F-plazmid, azaz “szexfaktor” jelenléte vagy hiánya határozza meg, hogy melyik baktériumsejt lesz a donor (F+) vagy a recipiens (F-)

F-plazmid tulajdonságai: replikatív, konjugatív, integratív

  1. Replikatív, konjugatív: extrakromoszómás, kis cirkuláris DNS, a konjugációs híd kialakításához szükséges géneket tartalmazza (ezért donor az F+ sejt)
  2. Integratív: a kromoszómába is képes integrálódni (Hfr törzs)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

R-plazmid

A
  1. RTF-faktort tartalmaz, ami azt kódolja, hogy a konjugációs píluson átjuthasson az R (rezisztencia)-plazmid (konjugatív)
  2. Egyéb génjei antibiotikum rezisztenciát vagy nehézfémekkel szemben fokozott toleranciát eredményező enzimeket kódolnak
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Virulencia plazmidok

A

Olyan tényezőket (ún. virulenciafaktorokat) kódolnak, amelyek a baktériumok patogenitása szempontjából fontosak

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Transzpozíció (génátrendeződés)

A

A transzpozáz enzim felismer bizonyos DNS-szakaszokat, inzerciós szekvenciákat –> felhasítja, majd a genom egy másik részébe beillszti a köztük levő régiót (pl.: plazmid –> kromoszóma, plazmid –> másik plazmid)

  1. Konzervatív transzpozíció: csak az új pozícióban található meg az átrendeződő DNS-darab
  2. Replikatív: mindkét helyen megtalálható

Transzpozon: két inzerciós szekvencia között transzpozáz és egyéb (pl. antibiotikum rezisztencia) gének vannak → önmagát áthelyezi → megváltozhat az
átrendeződő gének aktivitása (expressziójának mértéke) –> így alakulhat ki a „spontán mutáció” baktériumokban antibiotikumokkal szemben.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Fő pontok

A
  1. Fluktuációs teszt
  2. Lederberg-féle (bíbor) replika módszer
  3. Ames teszt
  4. Plazmidok típusai (F-plazmid, R-plazmid, Virulencia plazmid)
  5. Transzpozíció (géntranszfer)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly