20. A mikrobaszaporodás mérésének lehetőségei és megvalósításuk Flashcards
A mikrobaszaporodást hogyan mérjük, és milyen előkészület kell hozzá?
Folyadék mintákban sejtkoncentrációt (sejt/cm3) határozunk meg
Előkészület: higítási sor - 10-es alapú → egymás utáni lépésekben mindig 1 cm3 minta + 9 cm3 steril víz
A mikrobaszaporodás mérésének lehetőségei
- Telepszámlálás agarlemezen
- Mikroszkópos számlálás
- Legvalószínűbb csíraszám (MPN)
- Membránszűrés
- Szárazanyag-tartalom mérés
- Turbiditás mérés
- Anyagcsere-mérés
- Elektronikus sejtszámlálás
Telepszámlálás agarlemezen
Kitenyésztéses módszer → CFU (colony forming unit): telepképző egység (csak élő sejtek)
kétféle technika: szélesztés ill. lemezöntés
1. Szélesztés: ráöntjük a higított mintát az előre elkészített agaros tápközeg tetejére, steril üvegbottal (szélesztőbot) szélesztjük, megfelelő inkubálás után a képződött telepeket megszámoljuk
2. Lemezöntés: a higított mintát belekeverjük a folyékony agaros tápközegbe, együtt öntjük ki
azzal a Petri csészére → megdermed, majd innen kezdve nagyjából ugyanaz az eljárás
Mikroszkópos számlálás
Bürker kamra: ismert geometriájú kamrában megszámoljuk az általában hígítatlan mintában a
(nem feltétlenül élő!) mikrobasejteket
Legvalószínűbb csíraszám (MPN)
Táptalajon nem tenyészthető baktériumok esetén;
hígítási sort készítünk → 5 párhuzamos kémcső beoltása szintenként → +/– kiértékelés:
van/nincs gázképződés/zavarosodás/színváltozás → eredmény táblázatból
Membránszűrés
A folyadék vagy gáz halmazállapotú mintát átszűrjük membránszűrőn, majd lenyomatot készítünk a membránszűrőről agarlemezre → inkubáljuk
és megszámoljuk a képződő telepeket (kis sejtszám esetén!)
Szárazanyag-tartalom mérés
Az eleje u.a., mint a membránszűrésnél: A folyadék vagy gáz halmazállapotú mintát átszűrjük membránszűrőn, majd a membránszűrőt kiszárítjuk, lemérjük a tömegnövekedést (az „üres” membránhoz képest), ez arányos a sejtek számával
Turbiditás mérés
Folyékony minta fényáteresztő képességének mérése spektrofotométerrel → a mintán áthaladó fény intenzitását méri adott hullámhosszon, ami csökken a sejtkoncentráció növekedésével (indirekt mérés, kalibráció)
Anyagcsere-mérés
pl. gáztermelés, pH változás, O2 fogyasztás sebességének, stb. mérése (arányos a sejtek számával)
Elektronikus sejtszámlálás
Az elektrolit vezetőképessége csökken, ha benne sejtek vannak; egy mikrofuraton keresztül a mintát tartalmazó elektrolit két elektród között áramlik át → minden sejt egy feszültségimpulzust kelt, ezeket a műszer megszámlálja (nem szelektív a módszer!)
