10. Αιμολυτικό Συμπλήρωμα

Question 1

Που αποσκοπεί η άσκηση;

Answer 1

τική μέτρηση της ενεργότητας του συστήματος του
συμπληρώματος. Με τη λειτουργική δοκιμασία που παρουσιάζεται, μπορούμε να
εκτιμήσουμε την ενεργότητα της κλασικής οδού, υπολογίζοντας την CH50 (50% αιμόλυση
από την ενεργοποίηση της κλασικής οδού του συμπληρώματος). Η δοκιμασία βασίζεται
στη διαδοχική αραίωση (limiting dilution) δειγμάτων ορού (ως πηγή συμπληρώματος) και
στη χρήση προ-ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων.

Question 2

Ποια τα 2 στάδια ενεργοποίησης του συμπληρώματος;

Answer 2

α) Το πρώτο στάδιο, που είναι διαφορετικό και μοναδικό για κάθε
μία από τις τρεις οδούς, αφορά την ενεργοποίηση των πρώιμων παραγόντων του
συμπληρώματος, που οδηγούν στο σχηματισμό της αποκαλούμενης C3 κονβερτάσης
β) Το C3b συνδέεται
ομοιοπολικά στην επιφάνεια των παθογόνων μικροοργανισμών ή στα αρχικά
ανοσοσυμπλέγματα που είναι υπεύθυνα για την ενεργοποίηση του συστήματος του
συμπληρώματος. Συνάθροιση των τελικών παραγόντων C5b, C6,
C7, C8 και C9, οι οποίοι τελικά συγκροτούν το σύμπλεγμα μεμβρανικής επίθεσης (ΜΑC) επάνω στη μεμβράνη των παθογόνων, οδηγώντας στη λύση τους.

Question 3

Ποιες οι σημαντικές λειτουργίες του συμπληρώματος;

Answer 3

• Προσκόλληση, μέσω υποδοχέων C3b πολλών κυτταρικών τύπων, όπως
ερυθροκυττάρων, ουδετερόφιλων, βασεόφιλων, λεμφοκυττάρων και δενδριτικών
κυττάρων.
• Αναφυλατοξική δραστικότητα με τη μεσολάβηση των συστατικών C3a και C5a, που
προκαλούν την έκλυση μεσολαβητών και ενζύμων από βασεόφιλα και μαστοκύτταρα.
• Χημειοταξία με τη μεσολάβηση των συστατικών C3a και C567

Question 4

Ποιες είναι οι μέθοδοι μέτρησης της ενεργότητας του συστήματος του συμπληρώματος;

Answer 4

1) λειτουργικές δοκιμασίες αιμόλυσης, οι οποίες ποσοτικοποιούν τη μεσολαβούμενη
από το συμπλήρωμα αιμολυτική ενεργότητα CH50 (ενδεικτική για την ενεργότητα της
κλασικής οδού) και την ΑΡΗ50 (ενδεικτική για την ενεργότητα της εναλλακτικής οδού)
2) ανοσοχημικές μέθοδοι, οι οποίες προσδιορίζουν την παρουσία και μετρούν τη
συγκέντρωση (τίτλο) συγκεκριμένων μορίων/παραγόντων του συστήματος του
συμπληρώματος στον ορό, καθώς και τα πρωτεολυμένα προϊόντα τους.

Question 5

Από τι εξαρτάται η μονάδα C50 (50% λύση ερυθροκυττάρων);

Answer 5

Η μονάδα CH50 εξαρτάται από:
• τη συγκέντρωση ερυθροκυττάρων και αντισωμάτων,
• τη ρυθμιστική κατάσταση του μέσου και
• τη θερμοκρασία.
Άρα, ο ορισμός της μονάδας CH50 είναι αυθαίρετος και εξαρτάται αποκλειστικά από τις
συνθήκες του πειράματος.

Question 6

Που χρησιμεύει ο βαρβιτουρούχος φυσιολογικός ορός ;

Answer 6

Προστασία από το να σπάσουν μόνα τους τα ερυθροκύτταρα.

Question 7

Πως καταλαβαίνουμε αν η ενεργότητα είναι σε επιθυμητά επίπεδα;

Answer 7

Όσο μικρότερος όγκος συμπληρώματος προκαλε τη λύση του 50% των κυττάρων, τόσο δραστικότερο θα είναι το αντίστοιχο σύστημα του συμπληρώματος

Question 8

3) Με ποιο τρόπο ενεργοποιήθηκε το συμπλήρωμα, που χρησιμοποιήθηκε στο πείραμα ;

Answer 8

Γενικά το συμπλήρωμα ενεργοποιείται είτε από την είσοδο παθογόνων στον οργανισμό, είτε από την παρουσία ανοσοσυμπλεγμάτων. Στην δεύτερη περίπτωση ενεργοποιείται η κλασική οδός, με πρώτο βήμα τη σύνδεση το C1 μορίου σε κάποιο από τα αντισώματα της οικογένειας IgM ή στα αντισώματα IgG1, IgG2 και IgG3. Στο πείραμα η ενεργοποίηση του συμπληρώματος γίνεται με τη χρήση ερυθροκυττάρων προβάτου που έχουν καλυφθεί με αντισώματα (SRBCs καλυμμένα με αντι-SRBCs αρουραίου). Επομένως, μελετάται η ενεργότητα της κλασικής οδού του συστήματος του συμπληρώματος.