Vorlesung 9 Flashcards
Positionsspezifische DNA Rekombination
CSSR (Konservative positions-spezifische Rekombination; kann zur Umkehr der Sequenz kommen) oder Transposition
Hauptursache für spontane Mutation
Schlüsselrolle bei viraler Infektion
Schlüsselrolle bei Entwicklung des Immunsysntems
Transposition
eine Position -> neue Position springen
50% des menschlichen Genoms aus Transposons
Phagenzyklus
normaler pathway: lytischer Zyklus, Bakterienzelle wird aufgelöst, Phagen freigesetzt
DNA Zircularisiert, exprimiert, Phagen assmbliert, Zelle lysiert, Freisetzung
T-Phagen haben nur lytischen Zyklus
Lysogener Weg: Zelle KANN lysiert werden; DNA als Prophage eingebaut und stummgeschalten
Prophage kann aktiviert werden und in lytischen Zyklus übergehen
Phagengenom, positionsspez DNA Rekombination
Phage hat Rekombinationsstelle, Bakteriengenom auch
Rekombinationsereignis möglich
Rekombinase/Integrase erkennt Sequenzen
3 Möglichkeiten: Insertion, Deletion (Rekombinationsstellen in in gleiche Richtung gerichtet); Inversion, wenn Rekombinationsstellen in verschiedene Richtung gerichtet
Rekobinationsstellen werden nämlich aneinander ausgerichtet-> Schleifenbildung bei Deletion, Haarnadel bei Inversion
Rekombinationsstllen, Aufbau, Ablauf
TAGC, flankiert von inversen Sequenzen
Rekombinasen sind tetramere, jeweils 2 UE binden an jeden Strang an die flankierenden invers laufenden Palindormsequenzen
2 UE tauschen Position und nehmen DNA Strang mit
dann Ligation
koservative Rekombination, Rekombinasen
kein ATP Verbruach, kein Energieverlust, Anzahl der Phosphodiester-Bindungen bleibt konstant
Serin Rekombinase
beide Stränge komplett durchgeschnitten
kovalente Bindung
SWAP DNA Partners, UE nehmen DNA mit
freie 3’ Enden, Rekombinase über 5’ Ende an DNA gebunden
Überkreuzung von Einzelsträngen, Holliday Struktur
Tyrosin Rekomboinasen
Schnitte zeitlich versetzt
freie 5’ Oh Gruppe, kovalente Bindung von P am 3’ OH
nur Einzelstrangschnitt (nick), 1.Überkreuzung, Kolliday-Strktur, 2. Nick und Überkreuzung
tRNA gene
sicherer Hafen für Phagen
stem loop als Bindungsstelle
weil viel mehr tRNA Gene in E coli und Mensch als nötig
Cre (-> Cre Rekombinase)
Rekombinase aus Phage P1 (hat lysogenen und lytischen Zyklus)
im lysogenen Zyklus liegt Phagen DNA wie als Plasmid vor
an beiden Enden der Phagen DNA Rekombinationsstellen loxP
Autausch der DNA Doppelstränge, kleiner Teil abgeschnitten, Plasmid entsteht aus linearer DNA
Cre/loxP System
Target Gen von 2 loxP Site flankiert
mit Cre Rekombinase soll Rekombination ausgelöst werden und Target Gen deletiert werden
1x Maus: Gen gefloxt
1x Maus: Cre mit Protomor des Gens eingebracht
Promotor für Cre
organspezifisch, entwicklungspezifisch, induzierbar
bakteriophage lambda
integriert DNA als Prophage
macht das gleiche wie P1, nur Rekombinationsstellen nicht auf eigener DNA
…
Salmonella
Rekombinatiosstellen
Regulation der Flagellin-Gene H1 und H2
Region dazwischen invertable Segmente
H2 oder H1
H1 überlegt länger
Transposons Aufbau
Tranpoasase,
…flankiert vin target site repeats
