Ve. Hibridación de ácidos nucleicos Flashcards
La_________ es una simple y poderosa forma de detectar secuencias específicas de________empleando sondas (__________) marcadas:
Hibridación de ácidos nucleicos
Nucleótidos
Material genético
V o F, los ácidos nucleicos involucrados en la hibridación proceden de fuentes diferentes:
Verdadero
V o F, los ácidos nucleicos involucrados en la hibridación previamente formaban una doble cadena:
Falso, no lo hacían
V o F, las sondas en la hibridación de ácidos nucleicos son de cadena sencilla:
Verdadero
Son 2 cadenas de á. nucleicos complementarias pero como tal no formaban un duplex original:
Hibdridación
Hibridación de 2 cadenas desnaturalizadas previamente y que sí son de un duplex original:
Renaturalización
Son los 5 tipos de hibridación:
Hibdridación in situ (FISH
Southern Blot (DNA))
Northern Blot (ARN)
Dot Blot
Hibridación de colonias o placas
La hibridación _________es una técnica de marcaje de____________que permite mapear la ubicación relativa de secuencias____________a lo largo de secuencias___________de ADN mediante la ____________de sondas que emiten___________:
In situ
cromosomas
diferentes
únicas
hibridación
fluorescencia
V o F, la hibridación in situ fue desarrollada inicialmente en 1969 con marca fluorescente:
Falso, fue con marca radioactiva
¿Cuándo se usa la hibridación in situ?
Cuando hay sospecha de anormalidad cromosómica en algún sx concreto habiendo excluido otras posibilidades no genéticas
V o F, la hibridación in situ también permite localizar la expresión génica en un tejido:
Verdadero
Son los 4 pasos de hibridación in situ:
- Desnaturaliza
- Se hibrida
- Lavado
- Localización
El ioduro de propidio tiñe al cromosoma de:
Rojo
En la hibridación in situ, las células usa cromosomas en esta fase:
Metafase, ya que se hallan condensados
¿En qué fase se separan y desnaturalizan los cromosomas en la hibridación in situ?
En metafase
Regiones repetidas de cromosomas o telómeros:
ADN satélite
La incubación con ADN biotinado y lavado, es para:
Eliminar el ADN no hibridado
Al incubar con avidina marcada con fluorescencia, nos revela:
Localización de la sonda de ADN marcada
Son los 5 tipos de sondas:
- Específicas de Locus
- Fusión dual
- Doble color para ruptura
- Centroméricas (satélites)
- Teloméricas
Son características de las sondas específicas de Locus:
*Ver anomalías cromosómicas numéricas (aneuploidías)
*Son específicas para una región cromosómica única
*En la imagen se deben ver 2 señales por núcleo
*Ver anomalías cromosómicas estructurales
*Una deleción/duplicación del cromosoma originará una señal o más de dos
Tipos de anomalías cromosómicas numéricas que ven las sondas específicas de locus:
*Monosomía: falta un cromosoma del par
*Trisomía: más de dos cromosomas en vez del par
¿Qué anomalías cromosómicas estructurales se pueden ver con las sondas específicas de locus?
Deleción: pérdida o se eliminó una parte del cromosoma
Duplicación: se duplicó parte del cromosoma
Tipos de sondas para hibridación que se unen a regiones contiguas al punto de translocación:
Fusión dual
Anomalía cromosómica estructural donde se transfiere una parte de un cromosoma al otro:
Translocación
V o F, las sondas de hibridación de fusión dual se observarán como una señal conjunta:
Verdadero
Tipos de sondas para hibridación que revelan eventos de translocación:
Sondas de doble color para ruptura
Las sondas de doble color para ruptura se unen al____________ intacto flanqueando el punto de____________:
Cromosoma
Ruptura
En la sonda de doble color para ruptura, cuando la translocación ocurre, la sonda….
Se separa
Tipos de sondas de hibridación que hibridan en regiones repetidas que rodean los centrómeros:
Sondas centroméricas (satélites)
V o F, las sondas centroméricas (satélites) pueden detectar aneuploidía de cualquier cromosoma:
Verdadero
Las sondas teloméricas son útiles para revelar pequeñas_____________ o _______________ que no son fáciles de visualizar en el ______________ estándar:
Deleciones
Translocaciones
Cariotipo
V o F, en la hibridación por Southern Blot y Northern Blot, hacen transferencia de corrimiento electroforético a una membrana:
Verdadero
V o F, el Southern Blot y Northern Blot evidencian la secuencia que se separó gracias a la hibridación de la sonda:
Verdadero
El Southern Blot y Northern Blot tienen como objetivo identificar ____________ de interés en el _________________ inmovilizado en una matriz de _______, __________ o _____________:
Secuencias
Ácido nucleico
papel, nylon, nitrocelulosa
En el Southern Blot y Northern Blot la transferencia puede ser ___________ o _______________:
Pasiva
Electrotransferencia
Un ejemplo de este es ADN genómico digerido previamente con enzimas de restricción:
Southern Blot
Un ejemplo de este es un análisis de expresión o niveles del ARNm:
Northern Blot
La sonda marcada o acoplada a una etiqueta puede marcarse con:
Fósforo radioactivo 32p
Digoxigenina (DIG): actualmente usado
En la digoxigenina (DIG) el anticuerpo se halla acoplado a:
Fosfatasa alcalina, la cual se impregna en el sustrato quimioluminiscente y emite la fluorescencia
Es el sustrato quimioluminiscente en la sonda marcada o acoplada a una etiqueta:
CSPD
En el Southern Blot, para su interpretación se debe de considerar la _______________ que se está analizando y lo que representa el que haya o no _________________ de la sonda empleada:
Muestra
Reconocimiento específico
El análisis de la expresión de genes puede ser a niveles de:
Proteínas: proteómica
Transcrito: transcriptoma
ARNm
A nivel del ARNm del análisis de expresión de genes puede ser:
RT-qPCR
Northen Blot
Microarreglos
El RT-qPCR y Northen Blot que están a nivel del ARNm del análisis de expresión de genes, pueden con solo….
Unos o pocos genes a la vez
En los microarreglos que están a nivel del ARNm del análisis de expresión de genes, pueden con…
Varias decenas, cientos o miles de genes al mismo tiempo
El Northern Blot es un __________ de un gen relacionado con el____________
Nivel de expresión
Cuadro clínico
V o F, el Dot Blot es útil tanto para muestras de ADN como de ARN:
Verdadero
En el Dot Blot, en vez de hacer la separación__________ en gel de cada una de las __________, éstas se aplican con un ______________ en la membrana directamente:
Electroforética
Muestras
Capilar
El Dot Blot permite analizar de forma _________ la presencia de una ____________ específica en una ___________ determinada:
Rápida
Secuencia
Muestra
V o F, el Dot Blot solo quiere reconocer muestras que no lleguen a separación electroforética:
Falso, quiere conocer las que sí llegan
En la hibridación de colonias o placas, la membrana se pone en contacto con….
Las colonias
En la hibridación de colonias o placas la____________ se trata de forma que se promueve que el __________ o el __________ quede expuesto y pueda hibridar con la ___________ marcada:
membrana
ADN
ARN
sonda
V o F, en la hibridación de colonias o placas la colonia identificada de esta forma no puede ser resembrada y expandida:
Falso, sí puede
