Vd. Secuenciación de ADN Flashcards
La secuenciación de ADN fue posible gracias a la introducción de:
Métodos electroforéticos
Conocimiento de la química de los nucleótidos
metabolismo del ADN
V o F, en la secuenciación del ADN en un principio se usó marca fluorescente y posteriormente radiactiva:
Falso, primero fue la radioactiva y luego la fluorescente
Son los 4 tipos de métodos de secuenciación del ADN:
Químico
Enzimático
Siguiente generación
Secuenciación por bisulfito
Método químico de la secuenciación de ADN:
Maxam y Gilbert (radioactividad)
Son los métodos enzimáticos de la secuenciación del ADN:
Sanger (radioactividad)
Automatizada (variación de sangrer usando fluorescencia)
Son los métodos de siguiente generación de la secuenciación del ADN:
454-Pirosecuenciación
Ilumina
Son las 3 etapas del método de Maxam y Gilbert:
Marcaje del ADN
Hidrólisis química específica del ADN
Análisis de los productos
El marcaje del ADN en el método de Maxam y Gilbert consiste en:
Marcar el extremo 5´de cada hebra
¿Qué es lo más común para marcar el extremo 5´de cada hebra en el Método de Maxam y Gilbert?
Polinucleótido cinasa
ATP radiactivo
La polinucleótido cinasa que es usada como nucleasa en el marcaje de ADN en el método de Maxam y Gilbert, in vitro esta actúa como:
Une nucleótidos en vez de separarlos
La hidrólisis química específica del ADN del método de________________es para obtener fragmentos de ADN de hebra____________ marcados, de longitud ___________y que terminen en un____________conocido:
Maxam y Gilbert
sencilla
variable
nucleótido
En la hidrólisis química específica del ADN del método de Maxam y Gilbert, la muestra se divide en ____________y cada una recibe____________diferente con el fin de eliminar separadamente las bases____________y___________
4 alícuotas
Tratamiento químico
Púricas (A y G)
Pirimidínicas (T y C)
Agentes químicos usados en la hidrólisis química específica del ADN del método de Maxam y Gilbert para dividir las muestras:
Dimetil sulfato
Ácido fórmico-dimetilsulfato-piperidina
Hidrazina-piperidina
Hidrazina-1-5M NaCl-piperidina
Agente químicos usado en la hidrólisis química específica del ADN que corta en la G:
Dimetil sulfato
Agente químicos usado en la hidrólisis química específica del ADN que corta en A o G:
Ácido fórmico-dimetilsulfato-piperidina
Agente químicos usado en la hidrólisis química específica del ADN que corta en C o T:
Hidrazina-piperidina
Agente químicos usado en la hidrólisis química específica del ADN que corta en C:
Hidrazina-1-5M NaCl-piperidina
En el análisis de los productos del método de Maxam y Gilbert las ____________ obtenidas se analizan por_______________:
4 mezclas
Electroforesis
Método que se basa en el mecanismo normal de la replicación
Método de Sangers
El método de Sanger, la DNA polimerasa extiende la cadena de DNA debiendo estar presente el ____________ en el _________ de la desoxirribosa
Grupo hidroxilo
Carbono 3’
Los_________ carecen del _________ necesario para que se lleve a cabo la polimerización
ddNTPs
Grupo 3’ hidroxilo
¿Qué sucede en la polimerización en el método de Sanger al agregar ddNTPs a la cadena creciente?
Se interrumpe y forma fragmentos de diferente logitud
La polimerasa empleada en el método de Sanger carece de esta actividad…
3’-5’ exonucleasa de corrección
En este método enzimático de la secuenciación del ADN los ddNTPs están marcados con fluorescencia
Secuenciación automatizada
