IVd. Secuenciación de proteínas y cristalografía Flashcards
_______determinó la secuencia de ______ de las cadenas polipeptídicas de la hormona insulina:
Frederick Sanger
Aminoácidos
Es posible determinar la secuencia de aminoácidos a partir del conocimiento de________
Secuencia del genoma
La secuencia de _________ en un péptido o _______ se halla especifícada________
Aminoácidos
Proteínas
Genéticamente
Si una proteína se aísla puede analizarse para encontrar:
La secuencia de aminoácidos que la conforman
Se clona la secuencia de _______ que codifican a la__________, la cual también se clona para su estudio y hacer cambios en la secuencia. A esto se le llama:
ácidos nucleicos
proteína
Análisis funcional y/o estructurales
Es el flujo de trabajo para secuenciación:
- Extracción de proteínas
- Separación de proteínas
- Procesamiento para secuenciación
La cuantificación, por ejemplo Bradford, se usa en este paso de la secuenciación:
Extracción de proteínas
La SDS PAGE, 2D, se usa en este paso de secuenciación de proteínas:
Separación de proteínas
El SDS PAGE,2D, permite la separación de proteínas por:
Su criterio de pureza
Además del SDS PAGE, 2D, las proteínas pueden separarse por:
Cromatografía de exclusión molecular, de afinidad, de intercambio iónico
Los agentes reductores y alquilación de cisteínas se usan en este paso de secuenciación de proteínas:
Procesamiento para secuenciación
Eliminar puentes disulfuro:
Agentes reductores
Evita puentes disulfuro:
Alquilación de proteínas
Permite determinar cuáles aminoácidos están presentes y en qué proporción:
Hidrólisis completa
Son los pasos de procesamiento de secuenciación de proteínas:
- Extracción
- Separación
- Proceso de secuenciación:
3.1 Agentes reductores
3.2 Alquilación de proteínas
3.3 Hidrólisis completa
3.4 Digestiones individuales , purificación de los fragmentos, secuenciación de cada fragmento, determinación de la secuencia global
En el procesamiento para secuenciación; las digestiones individuales son:
Por 2 diferentes agentes
En el procesamiento para secuenciación, las digestiones individuales con dos agentes es para obtener:
Péptidos menores a 3 KDa
En el procesamiento para secuenciación, la determinación de la secuencia global es por:
Traslape de los fragmentos individuales
Los métodos de fragmentación de cadenas polipeptídicas todos son:
Proteasas
Los métodos de fragmentación de cadenas polipeptídicas todos son proteasas, excepto:
Bromuro de cianógeno
La ruptura de cadenas polipeptídicas por proteasas puede ocurrir en estas partes del aminoácidos indicado:
Extremo carboxilo (C)
Extremo amino (N)
La tripsina, de páncreas bovino, corta el aminoácido en esta parte:
Lisina (Lys) y Arginina (Arg)–> C
La proteasa submaxilar, corta el aminoácido en esta parte:
Arg (C)
La quimiotripsina, corta el aminoácido en esta parte:
Phe, Trp, Tyr –> C
Sthapylococcus aureus, corta el aminoácido en esta parte:
Asp, Glu (C)
La proteasa Asp-N-proteasa, corta el aminoácido en esta parte:
Asp, Glu (N)
La pepsina, corta el aminoácido en esta parte:
Leu, Phe, Trp, Tyr–>N
El bromuro de cianógeno, corta el aminoácido en esta parte:
Met (C)
La secuenciación de proteínas tiene lugar por estas 2:
- Reacciones para identificar el aminoácido N-t
- Espectrometría de masas
Las reacciones para identificar el aminoácido N-t son:
-Sanger
-Edman
MALDI, ESI y MS/MS son sistemas de ionización para:
Espectrofotometría de masas
Reactivo de Sanger:
2,4-dinitro-fluoro-fenilo