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Biología molecular > Va. Extracción, cuantificación y purificación de ácidos nucleicos > Flashcards

Va. Extracción, cuantificación y purificación de ácidos nucleicos Flashcards

1
Q

La cuantificación y determinación de pureza de los ácidos nucleicos está dada por:

A

Espectrofotómetro

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Q

La purificación de los ácidos nucleicos está dada por:

A

Cromatografía de afinidad
Electroforesis

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Q

Tipos de electroforesis:

A

Convencional en gel
Campo pulsado
Capilar

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4
Q

Es el primer paso en la tecnología del ADN recombinante:

A

Aislamiento del ADN

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5
Q

¿Dónde se halla el ADN genómico de la célula eucariota?

A

Núcleo

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6
Q

El ADN genómico se halla asociado a:

A

Proteínas

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7
Q

¿Dónde se halla el ADN plasmídico?

A

Procariotas

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8
Q

¿Cuál es la función del buffer de lisis en la extracción de ADN genómico?

A

Mantener pH
Romper membranas
Desnaturaliza y degrada proteínas

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9
Q

Son los 7 pasos para la extracción de ADN genómico:

A
  1. Muestra de células
  2. Añadir buffer de lisis
  3. Precipitar proteínas
  4. Precipitar ADN
  5. Lavado
  6. Resuspender en agua libre nucleasas
  7. Cuantificar y determinar pureza
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10
Q

En la extracción del ADN genómico, este se precipita con:

A

Alcohol frío
Concentraciones elevadas de sal

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11
Q

Es el método más común para separar las células mononucleares de sangre periférica (CMSP):

A

Gradiente de Ficoll que separa por diferencias de gradientes

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12
Q

Son los componentes que forman al buffer de lisis:

A

Tris-HCL: 50 mM
SDS: 1%
Proteasas: proteína K (2mg/ml)

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13
Q

¿A qué pH se debe de hallar el Tris-HCL del buffer de lisis?

A

8.0

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14
Q

¿Cuál es la función del Tris-HCL en el buffer de lisis?

A

Mantener pH para que el ADN mantenga su carga negativa

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15
Q

Detergente aniónico del buffer de lisis para romper las membranas y se libere el ADN:

A

SDS 1%

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16
Q

¿Cuál es la función del SDS en el buffer de lisis?

A

Desnaturaliza proteínas y sean accesibles a proteasas

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17
Q

La proteinasa K del buffer de lisis se aisló de:

A

Hongo Tritirachium album

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18
Q

¿En qué condiciones se halla activa la proteinasa K del buffer de lisis?

A

Bajo condiciones desnaturalizantes

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19
Q

V o F, la proteinasa K es una serina proteasa:

A

Verdadero

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20
Q

Son las 3 funciones de la proteinasa K del buffer de lisis:

A

Activa contra proteínas nativas y desnaturalizadas
Inactiva ARNasas ADNasas
Destruyen proteínas que crean un enlace con el ADN

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21
Q

¿Qué proteínas que crean un enlace con el ADN, pueden ser destruidas por la proteinasa K?

A

Polimerasas
Factores de transcripción
Histonas

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22
Q

La proteinasa K del buffer de lisis aumenta:

A

-Pureza de ADN y que se contamine menos por proteínas
-Calidad/cantidad de ADN no degradado

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23
Q

¿Con qué soluciones se puede precipitar las proteínas para la extracción de ADN genómico?

A

Soluciones de acetona

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24
Q

¿Qué queda en el sobrenadante cuando se centrifugan proteínas para poder precipitarlas?

A

Ácido nucleico

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25
Al precipitar ADN por sales (NaCl), estos iones se encargan de:
Neutralizar cargas negativas de los grupos P
26
V o F, al precipitar ADN con sales, las moléculas se repelen:
Falso, se juntan
27
Al precipitar el ADN con sales, disminuye_______________ y así se facilita____________ al añadir__________:
Solubilidad del ADN Precipitar el ADN Alcohol
28
Son características del alcohol frío (etanol) que precipita el ADN:
Miscible con agua Menos polar que el agua
29
V o F, el ADN es soluble en etanol:
Falso, no lo es
30
¿Quién es más polar del ADN y ARN en alcohol frío (etanol)?
ARN, por lo tanto no precipita
31
Función de la T° al precipitar el ADN:
Al disminuirse la T° se insolubiliza más el ADN
32
Función del etanol al 75% en los lavados:
Remueve sales e impurezas no disueltas en el ADN
33
La solubilización del ADN en agua libre de nucleasas se da en este paso de la extracción del ADN genómico:
6. Resuspensión del ADN
34
Los espectros de absorbancia de á. nucleicos y proteínas muestran estos niveles máximos:
260nm: á. nucleicos 280nm: proteínas
35
El espectrofotómetro calcula la concentración de á. nucleicos en la solución con base a:
Absorbancia a 260 nm
36
Coeficiente que determina la pureza:
260/280
37
¿En qué paso de la extracción del ADN genómico se utilizan los espectros para calcular la concentración de ácidos nucleicos?
7. Concentración y pureza
38
El método del Fenol-cloroformo en la extracción del ARN, tiene esta función similar al SDS en la extracción de ADN:
Romper membranas Desnaturaliza proteínas Libera ácidos nucleicos asociado a otras moléculas
39
En la extracción del ARN, la adición de más cloroformo provoca:
Separación de las fases
40
Entre el fenol y el cloroformo, ¿quién tiene mayor polaridad?
Fenol, el cloroformo es inmiscible en agua
41
El ADN al ser menos polar que el ARN, se queda entre estas dos fases:
Fase acuosa y fenólica junto con las proteínas
42
¿En qué fase el ARN se halla disuelto?
Fase acuosa
43
¿Qué tipo de alcohol se adiciona para poder precipitar el ARN y después centrifugarlo?
Alcohol frío (isopropanol)
44
Entre el isopropanol y el etanol, ¿cuál es más polar?
Etanol
45
Factores extrínsecos a la partícula que determinan su movilidad electroforética:
1.Concentración de agarosa 2. Voltaje que se aplica 3. Tiempo de corrida 4. T°
46
El polisacárido de Agarosa se halla formado por:
B-(1-4)-(3-6)-anhidro-L-galactosa a-(1-3)-D-galactosa
47
La agarosa es soluble en agua y a temperaturas superiores a:
65°C
48
Concentración de agarosa:
0.5-4%
49
La movilidad_________al aumentar el % de agarosa:
Disminuye, pero se separa mejor
50
Cuando se aumenta el voltaje la movilidad__________ aunque puede no_____________la resolución:
Aumenta incrementar
51
Voltaje típico por cada cm de gel
Aprox. 10V/cm de gel
52
Aproximadamente, ¿Cuánto mide un gel de agarosa y cuál es el voltaje adecuado para su tamaño?
100-130V y mide 10-15 cm
53
¿Qué voltaje genera una mejor resolución por cm de gel?
5V/cm de gel
54
V o F. A mayor tiempo de corrida menor resolución
Falso, es mayor la resolución
55
Al ______ la temperatura, la movilidad ______ como si hubiera ______ la concentración de agarosa
Incrementar Aumenta Disminuido
56
¿Qué le sucede al gel si la temperatura aumenta más de lo normal?
El gel puede fundirse, la temperatura se mantiene lo más bajo posible
57
Agentes que se usan para la visualización de los ácidos nucleicos por su florescencia
1. Bromuro de etidio 2. SYBR
58
¿Qué agente que se usa para la visualización de ácidos nucleicos se intercala entre las bases?
Bromuro de etidio
59
El bromuro de etidio absorbe de _________ a________ y emite fluorescencia de _______________
260-300nm Rojo-naranja
60
V o F. El bromuro de etidio detecta hasta 3 ng
Falso, es más sensible, detecta 1 ng; el agente que si detecta 3ng es el SYBR
61
¿Qué agente es menos tóxico pero menos sensible?
SYBR
62
¿En qué situaciones se agrega el bromuro de etidio?
Agarosa o post corrida
63
Son mezclas de moléculas de diferente PM que sirven de referencia para el análisis cualitativo de las muestras analizadas
Marcadores de peso molecular
64
Los marcadores de peso molecular son una mezcla de estas moléculas...
Ácidos nucleicos
65
Ejemplos de marcadores de peso molecular
DNA de fagos o plásmidos digeridos por enzimas de restricción
66
¿A qué se refiere el análisis cualitativo en marcadores de peso molecular?
Determinar el PM en una banda específica
67
La EMSA mide el....
Análisis de retraso en gel
68
¿Cuál es el fundamento de la EMSA?
Está basada en la interacción de ácidos nucleicos y proteínas (las cuales tienen mayor PM)
69
V o F. La electroforesis en gel de campo pulsado, se usa para la separación de grandes fragmentos de ADN
Verdadero, hasta millones de bases
70
En este tipo de electroforesis las moléculas se reorientan por cambios periódicos en la dirección del cambio eléctrico
Electroforesis en gel de campo pulsado
71
Al aplicar E1 las cadenas de ADN se ____________ y ____________ en esa dirección
Estiran Orientan
72
Al aplicar E2, perpendicular a E1, se obliga a las cadenas de ADN a ___________, _______________, y ___________ en una nueva dirección
Relajarse Elongarse Alinearse
73
En la electroforesis en gel de campo pulsado les toma_____________ tiempo reorientarse y exhiben ____________ movilidad
menor mayor
74
¿Cuál es el ángulo de reorientación entre E1 y E2?
>100°
75
¿Qué medios para evitar que el DNA se fragmente, se utilizan en la electroforesis de gel de campo pulsado?
Concentraciones de alta viscosidad y células completas
76
Previo al corrimiento electroforético en gel de campo pulsado, ¿Qué sucede con el ADN genómico?
Se digiere con enzimas de restricción
77
Cuando el ángulo alfa se incrementa, los campos eléctricos son...
Campos eléctricos no homogéneos
78
Cuando el ángulo alfa es constante, los campos eléctricos son...
Campos eléctricos homogéneos
79
¿Cuáles son los campos eléctricos no homogéneos?
PFGE OFAGE TAFE
80
¿Cuáles son los campos eléctricos homogéneos?
FIGE CHEF: más usada RGE
81
Cuanto _________ es el tamaño del ADN a separar, ___________ es la duración de los pulsos y __________ el voltage
mayor mayor menor
82
Electroforesis que es empleada en la secuenciación automatizada:
Electroforesis capilar
83
En la electroforesis capilar, se usan capilares de:
Sílice (SiO2) recubiertos de poliamidas
84
Campo eléctrico de la electroforesis capilar:
mayor a 100-500 V/cm
85
Tiempo que tarda en dar resultados la electroforesis capilar:
5-60 min
86
El ADN del gen discontinuo posee:
Intrones=mayor PM
87
El ADNc se corresponde a:
ARNm, que carece de intrones=menor PM

Biología molecular (19 decks)

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