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Biología molecular > Vc. PCR y sus variantes > Flashcards

Vc. PCR y sus variantes Flashcards

1
Q

¿Quién propuso el PCR en 1993?

A

Kary Mullis

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2
Q

Método de amplificar selectivamente una secuencia deseada de ADN de copia única, que se encuentra en una mezcla de ADN sin purificación

A

PCR

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3
Q

Función de los primer o cebadores en la PCR

A

Logran amplificar una zona de DNA

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4
Q

¿Qué tipos de DNA polimerasa participa en la PCR?

A

DNA polimerasa termoestable

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Q

¿Cuál es la función de la DNA polimerasa termoestable en la PCR?

A

Sintetiza la hebra complementaria incorporando dNTPs libres del medio de reacción

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6
Q

La ADN polimerasa termoestable fue dirigida inicialmente por…

A

Primers o cebadores

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7
Q

¿Cómo se componen los ciclos controlados de temperatura de la PCR?

A

Desnaturalización
Alineamiento
Elongación

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8
Q

¿Cuál es la temperatura usual para la desnaturalización en la PCR?

A

94 o 95°

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9
Q

¿Qué temperaturas en la PCR evitan que se renaturalice el DNA?

A

> 90°

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10
Q

¿Para qué se aumenta la temperatura?

A

Romper puentes de hidrogeno

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11
Q

Los primers o cebadores son ___________ específicos de ___________nt, cuya secuencia es ___________ a los extremos del fragmento que se desea ____________

A

Oligonucleótidos
20-23nt
Complementaria
Amplificar

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12
Q

¿Qué sucede con los primers cuando se disminuye la temperatura en la PCR?

A

Se hibridan especificamente en los extremos de la secuencia blanco

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13
Q

Los primers dirigen a la______________ que sintetiza la hebra _____________ incorporando nucleótidos libres del medio de reacción

A

DNA polimeras
Complementaria

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14
Q

Temperatura en la cual la polimerasa empieza a agregar nucleótidos en la PCR

A

72°

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15
Q

Al final del primer ciclo se obtiene____________ moléculas de DNA ______________ parcial que contiene la secuencia blanco

A

2
doble cadena

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16
Q

V o F. Solo el ADN que contiene la secuencia blanco es copiado

A

Verdadero

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17
Q

La polimerasa solo puede copiar moléculas que contienen…

A

Cebador único

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18
Q

Al final del segundo ciclo se obtienen _____hebras de DNA

A

8

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19
Q

Maquina de PCR o ____________, tiene la capacidad de mantener cambios de __________ cíclicos de forma precisa

A

Termociclador
Temperatura

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20
Q

Son las 3 fases de una PCR

A

Exponencial
Lineal
Plateau

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21
Q

¿En qué momento pasa la fase exponencial en ser fase lineal?

A

Cuando se empieza a agotar el número de cadenas (Ya no se amplifica)

22
Q

V o F. Al haber una cantidad excesiva de copias de DNA molde, se inhibe la reacción

A

Verdadero

23
Q

Hasta que punto en el PCR la amplificación se detiene

A

Los componentes de la reacción se agotan (Primers)

24
Q

Fase del PCR en la que la amplificación se detiene

A

Fase plateau

25
Q

V o F. En la PCR para detectar el genoma de un patógeno, el tamaño del amplificado (producto de PCR) se conoce de forma exacta su secuencia y el número de pares de bases que los primers están flanqueando

A

Verdadero

26
Q

Son las 7 variantes del PCR

A

1- Con adaptadores
2- Inversa
3- Mutagénesis dirigida
4- RT-PCR
5- Tiempo real (PCR cuantitativa-qPCR)
6- RT-qPCR
7- Múltiplex

27
Q

Variante de PCR donde se amplifica una región de ADN de secuencia desconocida

A

PCR con adaptadores

28
Q

En la PCR con adaptadores se unen_________a los fragmentos de restricción de extremos____________:

A

Adaptadores
Cohesivos

29
Q

Tipo de PCR que amplifica secuencias desconocidas con la condición de que se encuentren al lado de una secuencia de ADN sí conocida:

A

PCR Inversa

30
Q

La mutagénesis dirigida se refiere a una amplia variedad de técnicas____________ que modifican la secuencia______________________:

A

In vitro
Silvestre

31
Q

V o F, en la mutagénesis dirigida se pueden cambiar de una a tres bases en un segmento de ADN determinado sintetizando primers de PCR que lleven esos cambios:

A

Verdadero

32
Q

Tipo de PCR que emplea dos enzimas polimerasas:

A

RT-PCR

33
Q

Tipos de polimerasas que emplea la RT-PCR:

A

ADN polimerasa RNA dependiente (retrotranscriptasa)
ADN polimerasa ADN dependiente

34
Q

Polimerasa de la RT-PCR que sintetiza cDNA a partir de ARNm:

A

ADN polimerasa RNA dependiente (retrotranscriptasa)

35
Q

Polimerasa de la RT-PCR que amplifica el cDNA por PCR:

A

ADN polimerasa ADN dependiente

36
Q

Los clones de cDNA contienen secuencias__________________ que son _________________:

A

Codificantes
Discontinuas

37
Q

La PCR Tiempo real también se conoce como:

A

PCR cuantitativa (qPCR)

38
Q

La PCR Tiempo real________________y simultáneamente_____________de forma absoluta el producto específico:

A

Amplifica
cuantifica

39
Q

En la PCR Tiempo Real, el fluoróforo emite fluorescencia en función a:

A

Abundancia del producto de amplificación

40
Q

En la PCR Tiempo Real, la medición de la _________________ se realiza luego de cada ____________ de amplificación:

A

Fluorescencia
Ciclo

41
Q

Número de ciclos requeridos para que la fluorescencia específica sobrepase la fluorescencia de fondo inespecífica:

A

Ct (cycle threshold)

42
Q

La ct es inversamente proporcional a:

A

Cantidad de ADN blanco inicial

43
Q

Tipos de fluorescencia usadas en la PCR Tiempo real:

A
  1. SYBR green
  2. Sondas TaqMan
44
Q

V o F, el SYBR green es un agente intercalante:

A

Falso, se asocia a la molécula de ADN

45
Q

Al interactuar la SYBR green con la molécula de ADN, presenta un pico de absorción de________________y uno de emisión de_____________________:

A

498 nm
522 nm

46
Q

¿En qué se basan las sondas Taq Man?

A

Actividad 5´-3´exonucleasa de la polimerasa

47
Q

La fluorescencia resultante de la acumulación del producto se mide durante esta fase de la PCR:

A

Exponencial

48
Q

PCR en la que se amplifican más de una secuencia en una misma reacción:

A

PCR Múltiplex

49
Q

La PCR múltiplex emplea 2 o más pares de ___________________ en un único _____________ con el fin de amplificar simultáneamente múltiples_________________:

A

Primers
Tubo de reacción
Segmentos de ADN

50
Q

¿Qué sucede con el cDNA después de obtenerse a partir de ARNm por la DNA polimerasa RNA dependiente?

A

Se amplifica por PCR cuantitativa

Biología molecular (19 decks)

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