Vc. PCR y sus variantes

Question 1

¿Quién propuso el PCR en 1993?

Answer 1

Kary Mullis

Question 2

Método de amplificar selectivamente una secuencia deseada de ADN de copia única, que se encuentra en una mezcla de ADN sin purificación

Answer 2

PCR

Question 3

Función de los primer o cebadores en la PCR

Answer 3

Logran amplificar una zona de DNA

Question 4

¿Qué tipos de DNA polimerasa participa en la PCR?

Answer 4

DNA polimerasa termoestable

Question 5

¿Cuál es la función de la DNA polimerasa termoestable en la PCR?

Answer 5

Sintetiza la hebra complementaria incorporando dNTPs libres del medio de reacción

Question 6

La ADN polimerasa termoestable fue dirigida inicialmente por…

Answer 6

Primers o cebadores

Question 7

¿Cómo se componen los ciclos controlados de temperatura de la PCR?

Answer 7

Desnaturalización
Alineamiento
Elongación

Question 8

¿Cuál es la temperatura usual para la desnaturalización en la PCR?

Answer 8

94 o 95°

Question 9

¿Qué temperaturas en la PCR evitan que se renaturalice el DNA?

Answer 9

> 90°

Question 10

¿Para qué se aumenta la temperatura?

Answer 10

Romper puentes de hidrogeno

Question 11

Los primers o cebadores son ___________ específicos de ___________nt, cuya secuencia es ___________ a los extremos del fragmento que se desea ____________

Answer 11

Oligonucleótidos
20-23nt
Complementaria
Amplificar

Question 12

¿Qué sucede con los primers cuando se disminuye la temperatura en la PCR?

Answer 12

Se hibridan especificamente en los extremos de la secuencia blanco

Question 13

Los primers dirigen a la______________ que sintetiza la hebra _____________ incorporando nucleótidos libres del medio de reacción

Answer 13

DNA polimeras
Complementaria

Question 14

Temperatura en la cual la polimerasa empieza a agregar nucleótidos en la PCR

Answer 14

72°

Question 15

Al final del primer ciclo se obtiene____________ moléculas de DNA ______________ parcial que contiene la secuencia blanco

Answer 15

2
doble cadena

Question 16

V o F. Solo el ADN que contiene la secuencia blanco es copiado

Answer 16

Verdadero

Question 17

La polimerasa solo puede copiar moléculas que contienen…

Answer 17

Cebador único

Question 18

Al final del segundo ciclo se obtienen _____hebras de DNA

Answer 18

8

Question 19

Maquina de PCR o ____________, tiene la capacidad de mantener cambios de __________ cíclicos de forma precisa

Answer 19

Termociclador
Temperatura

Question 20

Son las 3 fases de una PCR

Answer 20

Exponencial
Lineal
Plateau

Question 21

¿En qué momento pasa la fase exponencial en ser fase lineal?

Answer 21

Cuando se empieza a agotar el número de cadenas (Ya no se amplifica)

Question 22

V o F. Al haber una cantidad excesiva de copias de DNA molde, se inhibe la reacción

Answer 22

Verdadero

Question 23

Hasta que punto en el PCR la amplificación se detiene

Answer 23

Los componentes de la reacción se agotan (Primers)

Question 24

Fase del PCR en la que la amplificación se detiene

Answer 24

Fase plateau

Question 25

V o F. En la PCR para detectar el genoma de un patógeno, el tamaño del amplificado (producto de PCR) se conoce de forma exacta su secuencia y el número de pares de bases que los primers están flanqueando

Answer 25

Verdadero

Question 26

Son las 7 variantes del PCR

Answer 26

1- Con adaptadores 2- Inversa 3- Mutagénesis dirigida 4- RT-PCR 5- Tiempo real (PCR cuantitativa-qPCR) 6- RT-qPCR 7- Múltiplex

Question 27

Variante de PCR donde se amplifica una región de ADN de secuencia desconocida

Answer 27

PCR con adaptadores

Question 28

En la PCR con adaptadores se unen_________a los fragmentos de restricción de extremos____________:

Answer 28

Adaptadores Cohesivos

Question 29

Tipo de PCR que amplifica secuencias desconocidas con la condición de que se encuentren al lado de una secuencia de ADN sí conocida:

Answer 29

PCR Inversa

Question 30

La mutagénesis dirigida se refiere a una amplia variedad de técnicas____________ que modifican la secuencia______________________:

Answer 30

In vitro Silvestre

Question 31

V o F, en la mutagénesis dirigida se pueden cambiar de una a tres bases en un segmento de ADN determinado sintetizando primers de PCR que lleven esos cambios:

Answer 31

Verdadero

Question 32

Tipo de PCR que emplea dos enzimas polimerasas:

Answer 32

RT-PCR

Question 33

Tipos de polimerasas que emplea la RT-PCR:

Answer 33

ADN polimerasa RNA dependiente (retrotranscriptasa) ADN polimerasa ADN dependiente

Question 34

Polimerasa de la RT-PCR que sintetiza cDNA a partir de ARNm:

Answer 34

ADN polimerasa RNA dependiente (retrotranscriptasa)

Question 35

Polimerasa de la RT-PCR que amplifica el cDNA por PCR:

Answer 35

ADN polimerasa ADN dependiente

Question 36

Los clones de cDNA contienen secuencias__________________ que son _________________:

Answer 36

Codificantes Discontinuas

Question 37

La PCR Tiempo real también se conoce como:

Answer 37

PCR cuantitativa (qPCR)

Question 38

La PCR Tiempo real________________y simultáneamente_____________de forma absoluta el producto específico:

Answer 38

Amplifica cuantifica

Question 39

En la PCR Tiempo Real, el fluoróforo emite fluorescencia en función a:

Answer 39

Abundancia del producto de amplificación

Question 40

En la PCR Tiempo Real, la medición de la _________________ se realiza luego de cada ____________ de amplificación:

Answer 40

Fluorescencia Ciclo

Question 41

Número de ciclos requeridos para que la fluorescencia específica sobrepase la fluorescencia de fondo inespecífica:

Answer 41

Ct (cycle threshold)

Question 42

La ct es inversamente proporcional a:

Answer 42

Cantidad de ADN blanco inicial

Question 43

Tipos de fluorescencia usadas en la PCR Tiempo real:

Answer 43

1. SYBR green 2. Sondas TaqMan

Question 44

V o F, el SYBR green es un agente intercalante:

Answer 44

Falso, se asocia a la molécula de ADN

Question 45

Al interactuar la SYBR green con la molécula de ADN, presenta un pico de absorción de________________y uno de emisión de_____________________:

Answer 45

498 nm 522 nm

Question 46

¿En qué se basan las sondas Taq Man?

Answer 46

Actividad 5´-3´exonucleasa de la polimerasa

Question 47

La fluorescencia resultante de la acumulación del producto se mide durante esta fase de la PCR:

Answer 47

Exponencial

Question 48

PCR en la que se amplifican más de una secuencia en una misma reacción:

Answer 48

PCR Múltiplex

Question 49

La PCR múltiplex emplea 2 o más pares de ___________________ en un único _____________ con el fin de amplificar simultáneamente múltiples_________________:

Answer 49

Primers Tubo de reacción Segmentos de ADN

Question 50

¿Qué sucede con el cDNA después de obtenerse a partir de ARNm por la DNA polimerasa RNA dependiente?

Answer 50

Se amplifica por PCR cuantitativa