Transformation bactérienne

Question 1

Qu’est-ce que la transformation bactérienne?

Answer 1

ADN est introduit dans une bactérie

Question 2

Avec quelle souche la transformation bactérienne est généralement réalisée en labo?

Answer 2

Escherichia coli DH5a

Question 3

Que faut-il faire avec les souches d’E. coli afin qu’elles deviennent aptes à recevoir de l’ADN exogène?

Answer 3

Les rendre «compétentes»

Question 4

Comment rend on E. coli compétente?

Answer 4

Traitement avec des solutions contenant un mélange de différents sels

Question 5

Comment le traitement aux sels rendrait-il E. coli compétente?

Answer 5

Augmente perméabilité membranaire bactérienne et favorise ainsi entrée d’ADN dans les bactéries

Question 6

Quelles doivent-êtres les caractéristiques de l’ADN pour transformer efficacement E. coli?

Answer 6

Circulaire et non linéaire

Question 7

Qu’est-ce qui facilite l’identification de clones bactériens ayant accepté et répliqué un plasmide recombinant?

Answer 7

Utilisation de certaines souches d’E. coli (DH5alpha ou INValphaF’) en combianison avec un vecteur de clonage (pUC19 ou pDrive)

Question 8

Comment distingue-t-on les colonies qui ont le fragment d’ADN cible d’inséré dans le vecteur vs ceux qui ne l’ont pas?

Answer 8

Colonies blanches : ont le fragment d’ADN

Colonies bleues : ne l’ont pas

Question 9

Expliquer pourquoi les colonies formées sont bleues ou blanches.

Answer 9

Insertion fragments au SCM : interruption séquence lacZ : pas de production peptide correspondant à partie N-terminale de b-galactosidase
Pas d’insertion : peptide produit : bactérie produit partie C-terminale : formation de b-galactosidase active par union et phénomène d’alpha-complémentation
Ajout de X-gal dans milieu : quand clivé : bleu
Insertion fragment : pas b-galactosidase : pas de clivage : colonie blanche
Pas d’insertion : b-galactosidase active : clivage X-gal : colonie bleue