Préparation d'ADN plasmidique

Question 1

En quoi consiste les méthodes permettant d’extraire et purifier de l’ADN plasmidique à partir de bactéries?

Answer 1

Lyser bactéries contenant plasmide

Isoler cet ADN de l’ADN génomique et autres composantes cellulaires

Question 2

Quelle technique dans le lab a permis de préparer l’ADN plasmidique?

Answer 2

Lyse alcaline

Question 3

Qu’a-t-on fait après la lyse alcaline pour analyser le plasmide?

Answer 3

Digérer par enzymes de restriction et analyser sur gel d’agarose

Question 4

Donner toutes les étapes de la méthode de préparation d’ADN plasmidique à partir de la culture des bactéries contenant le plasmide jusqu’à l’analyse des plasmides.

Answer 4

1 - culture bactéries contenant plasmide
2 - récolte bactéries par centrifugation
3 - suspension homogène bactéries avant la lyse
4 - Lyse des bactéries par détergent en milieu alcalin
5 - renaturation ADN plasmidique et précipitation ADN chromosomique par haute concentration de sels à pH acide
6 - déprotéinisation de l’ADN avec chloroforme
7 - précipitation ADN plasmidique avec éthanol
8 - lavage culot avec éthanol 70%
9 - dissolution culot et traitement à RNase pour détruire ARN

Question 5

Avec quelle solution les bactéries ont-elles été suspendues avant la lyse?

Answer 5

Glucose, EDTA et Tris

Question 6

Quelle solution a permis de faire la lyse des bactéries?

Answer 6

NaOH + SDS

Question 7

Quelle solution permet d’éliminer les protéines de la solution?

Answer 7

Chloroforme

Question 8

Quelle solution permet la précipitation de l’ADN plasmidique?

Answer 8

Éthanol 95%

Question 9

Quelle solution permet le lavage du culot?

Answer 9

Éthanol 70%