Préparation d'un gel d'agarose

Question 1

À quoi sert l’électrophorèse en gel d’agarose?

Answer 1

Séparer, purifier et identifier des fragments d’ADN ou d’ARN.

Question 2

Pourquoi l’électrophorèse en gel d’agarose est-elle une méthode de choix?

Answer 2

Facile, rapide
Peut être employée pour séparer fragments d’ADN qui ne peuvent pas être séparés par techniques de centrifugation ou filtration

Question 3

Qu’est-ce que l’agarose?

Answer 3

Polysaccharide hautement purifié extrait de l’agar (pas contaminé par matériaux chargés à la différence de l’agar)

Question 4

Pourquoi est-il important de couler le gel avant que la température de l’agarose dans le tampon atteigne 40 degrés celcius?

Answer 4

Car à cette température, il se solidifie en un gel stable et ne redevient liquide que si on le rechauffe à 100 degrés

Question 5

Comment peut-on faire varier la taille des pores d’un gel d’agarose?

Answer 5

En modifiant la concentration d’agarose

Question 6

Plus la concentration en agarose est élevée, plus la taille des pores est _____ .

Answer 6

Petite

Question 7

Entre quelle et quelle concentration travaille-t-on généralement pour les gels d’agarose?

Answer 7

Entre 0,3 et 2%

Question 8

Dans un gel d’agarose soumis à un champ électrique, les acides nucléiques migrent vers quelle borne?

Answer 8

+ (cathode) car positif

Question 9

Comment sont séparées les molécules dans un gel d’agarose?

Answer 9

Selon leur taille
Plus grandes plus retardées que les plus petites
Selon leur conformation (+ ou - compacte)

Question 10

Comment visualise-t-on les acides nucléiques après la migration sur gel d’agarose?

Answer 10

Avec colorants fluorescents

Question 11

Quel est le colorant le plus conventionnel et quelles sont ses caractéristiques?

Answer 11

Bromure d’éthidium
Apparaît orange sous UV
Seuil de détection d’environ 5ng/bande
Toxique et potentiellement mutagène et cancérigène

Question 12

Quels sont les nouveaux colorants qui remplacent le bromure d’éthidium et quelles sont leurs caractéristiques?

Answer 12

SYBR Gold, GelRed, etc

Moins toxiques et plus sensibles

Question 13

Quel tampon a été utilisé en lab pour faire les gels (tampon d’électrophorèse)?

Answer 13

TAE 1X

Question 14

Qu’est-ce qui influence le choix du voltage et la durée de migration?

Answer 14

Niveau de séparation voulu entre les molécules (résolution)

Question 15

Que veut dire TAE?

Answer 15

Tris acétate, EDTA

Question 16

Qu’est-ce qui doit être ajouté aux échantillons avant de les déposer dans les puits?

Answer 16

Solution de chargement

Question 17

Qu’est-ce qui fait normalement partie des échantillons à charger dans un gel afin de fournir une référence de taille ou de masse?

Answer 17

Marqueur de taille