Digestion par enzymes de restriction Flashcards
Quelle est la méthode d’analyse d’ADN plasmique la plus souvent utilisée?
Coupure par une (ou des) enzyme(s) de restriction et séparations des fragments par électrophorèse
Quels sont les facteurs qui influencent l’activité enzymatique?
Température
pH
Force ionique (Mg2+ essentiel)
Quelle est la température optimale de la majorité des enzymes?
37 degrés
À quoi servent les tampons de réaction à utiliser avec les enzymes vendues commercialement?
Procurer les conditions de pH et de force ionique optimales à leur activité
Combien de fois plus concentré que la concentration d’utilisation les tampons fournis avec les enzymes sont-ils généralement?
10X
Comment caractérise-t-on l’ADN avec la digestion enzymatique?
ADN est coupé en pls fragments selon le nb de sites de clivage de l’enzyme sur l’ADN
Fragments issus de digestion séparés par électrophorèse sur gel d’agarose à pH basique
Plus grands fragments migrent moins que petits et la longueur de chacun est déduite par comparaison avec série de fragments d’ADN de tailles connues
Établissement d’une carte de restriction
Pour établir une carte de restriction détaillant les sites de restriction, la digestion se fait-elle avec une ou plusieurs enzymes à la fois?
Plusieurs enzymes à la fois
Que contient une bonne préparation d’ADN plasmidique?
Surtout de l’ADN superenroulé
Pas d’ADN génomique ou ARN
Quelle conformation de plasmide migre le plus loin?
Superenroulé
Quelle conformation de plasmide migre le moins loin?
Relâchée
Est-ce que la conformation des plasmides change selon la souche de bactéries utilisée?
Oui, le degré de torsion est différent et produit un plasmide plus ou moins enroulé ou compact
La conformation linéaire peut-elle migrer plus rapidement que superenroulée?
Oui dans certains cas
Par quoi est influencée la vitesse de migration des conformations différentes de l’ADN plasmidique?
Par conditions d’électrophorèse : courant appliqué et force ionique du tampon d’électrophorèse
