Ligation au vecteur de clonage

Question 1

Quelle est la taille générale des plasmides?

Answer 1

10 kpb et moins

Question 2

Qu’est-ce qu’un vecteur d’ADN?

Answer 2

Molécules qui permettent le transfert d’ADN provenant d’autres organismes, dans une cellule hôte

Question 3

Quelles sont les 3 composantes générales d’un plasmide?

Answer 3

Origine de réplication
Site de clonage multiple
Gène de résistance à un antibiotique

Question 4

Sur quoi repose la stratégie de clonage Quiagen?

Answer 4

Repose sur le fait que la Taq pol ajoute un A à l’extrémité 3’ de ses produits de la PCR

Question 5

Qu’est-ce qui favorise un appariement insert-vecteur?

Answer 5

Ajout d’un T ou d’un U à l’extrémité 3’ du vecteur de clonage

Question 6

Quel est le vecteur fourni dans la trousse de Quiagen (quelles sont ses caractéristiques)?

Answer 6

pDrive (linéarisé et possède un U à ses extrémités 3’)

Question 7

Comment l’insertion du fragment d’intérêt dans le vecteur est-elle favorisée?

Answer 7

En jouant sur la proportion vecteur-insert : ratio molaire avec + d’insert que de vecteur est privilégié

Question 8

Quel ratio est recommandé pour favoriser la ligation entre des fragments d’ADN ayant des extrémités cohésives?

Answer 8

3 molécules d’insert : 1 molécule de vecteur

Question 9

Quel ratio est recommandé pour favoriser la ligation entre des fragments d’ADN ayant des extrémités francs?

Answer 9

5 insert : 1 vecteur

Question 10

Quel ratio molaire est recommandé pour le vecteur pDrive?

Answer 10

5 : 1 ou 10 : 1