Production de la GFP mutée Flashcards
De quoi est constitué un système d’expression in vivo?
Vecteur d’expression
Organisme «hôte» compatible
Quel est l’organisme hôte le plus fréquemment utilisé?
Escherichia coli
Pourquoi l’organisme hôte le plus fréquemment utilisé est E. coli?
Peu exigeante en culture
Bien caractérisée génétiquement
(pls souches améliorées génétiquement pour optimiser la production de prots recombinantes)
Quel promoteur contrôle l’expression de la GFP dans le plasmide créé au lab par assemblage de Gibson?
PBAD : promoteur inductible par arabinose
Que produit le gène araC?
Protéine de régulation AraC
En absence d’arabinose, quelle forme prend la protéine AraC? Que cela entraîne-t-il pour l’expression du gène?
Forme de dimère avec une autre prot AraC : liées à 2 sites distants dans ADN : forme un «loop» qui bloque accessibilité du promoteur au gène : pas (ou peu) d’expression du gène
En présence d’arabinose, quelle forme prend la protéine AraC? Que cela entraîne-t-il pour l’expression du gène?
Dimère AraC se lie à arabinose et délaisse ADN : chg de structure qui facilite liaison de ARN pol à promoteur PBAD : activation de la transcription du gène de la GFP
