Tossicologia

Question 1

Definizione di sostanza tossica

Answer 1

sostanza che a contatto con sistema biologico determina alterazione stato fisiologico che non è desiderato.

Question 2

Quali sono le tossicità peculiari che caratterizzano alcuni farmaci biotecnologici (esempi)?

Answer 2

1. Cetuximab, Panitumumab, Erkitubuv (→ recettori EGFR): hanno effetti tossici al sito di interazione. Causano tossicità cutanea causando rush cutaneo, eruzioni, acne giovanile, fotosensibilità. Si sviluppano entro prima settimane della terapia.
2. Bevacizumab (→ recettore VEGFR): causa tossicità del distretto vascolare inducendo trombosi, aritmie, emorragie, ipertensione. Gli effetti tossici si vedono nelle prime settimane.
3. Anticorpi monoclonali anti-TNFα: si somministrano a pazienti con artrite reumatoide. Spengono risposta immunitaria, possono riattivare tubercolosi o sepsi o causare complicanze neurologiche.

Question 3

Come posso fare analisi di tossicologia in vitro?

Answer 3

Ci sono vari test:
- Conta cellulare
- Colorazione per vitalità/morte cellulare
- Test MTT
- Saggi di attività enzimatica: sia su enzimi isolati direttamente da tessuti o cellule.
- Tecniche elettrofisiologiche per valutare attività canali ionici
- Binding recettoriale
- Monitoraggio di enzimi o secondi messaggeri coinvolti nella trasduzione del segnale
- Analisi di funzioni cellulari specifiche su cellule normali o trasformate o manipolate geneticamente.

Devo sempre usare un controllo di riferimento positivo e negativo

Question 4

Quali tecniche posso usare per fare la conta cellulare?

Answer 4

• Camera di burker
• Tecnica dell’esclusione di colorante: coloro con tripan blu, colorante che non supera la membrana quindi colora solo le cellule morte, conto le cellule NON colorate. Non posso usare questa tecnica a lungo termine

Question 5

Come posso distinguere le cellule vive e quelle morte in un’analisi in vitro?

Answer 5

Metodo 1:
Possiamo colorare cellule per vitalità o morte cellulare: possiamo utilizzare 2 coloranti diversi: uno marca quelle vive, l’altro quelle morte. Ottengo un rapporto tra cellule vive e morte che mi permette di capire quanto il mio anticorpo monoclonale ha inciso su vitalità o morte cellulare.
Problemi:
- Non è eterno: se voglio fare curva temporale, rischio che colorante possa uscire oppure che in seguito alla divisione cellulare il colorante diluisca
- Alcuni coloranti possono essere tossici in caso di incubazione prolungata
l rapporto tra cellule vive e morte può essere determinato in modo semplice conteggiando le cellule manualmente o usando un software di analisi dell’immagine.
Questo metodo offre un calcolo molto preciso del rapporto cellule vive/morte, ma può richiedere anch’esso molto tempo quando si analizza un gran numero di campioni.

Metodo 2: test MTT
Valuto la vitalità attraverso l’attività metabolica. L’MTT genera precipitati (sali di formazano) all’interno delle cellule metabolicamente attive.
1- Piastro le cellule e somministro l’anticorpo monoclonale
2- Uso sostanze che scoppiano le cellule per far uscire i sali
3- Misuro il viraggio di colore dal giallo al viola mediante uno spettrofotometro