Modelli Flashcards
Caratteristiche di una linea cellulare immortalizzata?
- Proliferazione rapida dipendente solo dalla presenza di metaboliti
- Possono acquisire caratteristiche diverse dalle cellule in vivo
- Disponibili commercialmente
- Coltura più semplice (meno esigenze trofiche e ridotta inibizione da contatto)
- Variabilità ridotta
Quali sono le condizioni sperimentali per la crescita di cellule in vitro?
- Temperatura tra 20 e 45 gradi: incubatore
- pH fisiologico controllato
- Scambio gassoso adeguato tra ossigeno 95 % e CO2 5%
- Il substrato deve includere
1. Amminoacidi
2. Carboidrati
3. Vitamine
4. Sali - Protezione da eventuali patogeni e utilizzo degli antibiotici (mix di penicillina e streptomicina)
- Sistemi tampone
Come valuto la salute di un terreno di coltura?
possono essere specifici in base alla linea cellulare che sto crescendo (Eagle’s Basal Medium, DMEM, Minimum Essential Medium…).
Deve sempre contenere indicatori di pH:
- Se il terreno diventa giallo: troppe cellule o contaminazione in atto. L’acidificazione è causata dalla CO2 prodotta dal metabolismo cellulare
- Se il terreno diventa rosa: il terreno è basico, le cellule non sono metabolicamente attive
Che cos’è e quali sono le caratteristiche del siero?
FBS (di origine bovina) o il siero di cavallo. Prima di ogni utilizzo, il siero viene disattivato in stufa a 56 gradi per 30 min allo scopo di eliminare il sistema del complemento, che potrebbe interferire con la crescita delle cellule.
Caratteristiche del siero:
- Formulazione aspecifica di fattori di crescita
- Sostegno alla crescita per molti tipi cellulari
- Aumenta la capacità tampone
- Protegge dai danni meccanici
- Facilita l’adesione
Quali sono i vantaggi e svantaggi dei modelli in vivo?
Vantaggi:
- Valuto l’effetto sistemico
- Monitoro più parametri biologici contemporaneamente
- Studio per un periodo di tempo prolungato
- Studio processi biologici complessi
- Valuto meccanismi di tossico cinetica.
Svantaggi:
- Costo
- Fattore bioetico (regole da seguire)
- Necessità di strutture e processi di stabulazione adeguati
- Elevata variabilità biologica delle rilevazioni sperimentali
Quali possono essere le cause ambientali per lo stress degli animali?
- Temperatura (ottimale 25 gradi)
- Umidità
- Ventilazione
- Illuminazione inappropriata
- Gabbie dimensioni inappropriate
- Rumore
- Cibo ammuffito o acqua sporca
- Cambio delle lettiere poco frequente
- Mancanza di stimolazione sociale: inserisco sabbia e tunnel per farli sfogare
- Deprivazione materna: bisogna svezzare gli animali in un tempo preciso ma non oltre 25 giorni di età. Se la mamma muore si prende un’altra mamma oppure cuccioli possono andare incontro a stress e morire, pratiche e comportamenti non professionali
Come riconosco un topo stressato?
l’animale perde pelo, si ha piloerezione e mantello arruffato, ha le orecchie basse, i baffi in giù, vocalizza con squittii molto alti, e diventa autolesionista e aggressivo quando manipolati.
mamme che mangiano i figli
Come viene classificata la gravità di una procedura?
1) Non risveglio: anestesia generale e l’animale non riprende più conoscenza. È un metodo di sacrificio in cui l’animale non soffre ma non si risveglia. È sempre da dichiarare al ministero.
2) Lieve: causano dolore, sofferenze e angoscia di tipo lieve e di breve durata. Non provocano significativo deterioramento del benessere dell’animale.
3) Moderata: causano dolore, sofferenze e angoscia di durata maggiore
4) Grave: causano dolore, sofferenza e angoscia di tipo intenso di lunga durata.
Definizione di dolore
esperienza sensoriale ed emotiva spiacevole associata ad un potenziale o reale danno ai tessuti. La percezione varia secondo il sito, la durata e l’intensità dello stimolo, può essere modificata da esperienze precedenti, stati emotivi e differenze individuali.
Definizione di paura
risposta emotiva psicofisiologica. Percezione pericolo conosciuto o già sperimentato.
Definizione di ansietà
stato emotivo soggettivo innescato da un potenziale pericolo sconosciuto.
Definizione di stress
effetto prodotto da eventi esterni o fattori interni, definiti stressors che inducono alterazione dell’equilibrio biologico dell’animale
Definizione di distress
stato nel quale animale è incapace di adattarsi completamente agli stressors mostrando comportanti mal adattativi.
Caratteristiche di una coltura primaria?
- Limitato numero di cicli cellulari
- Mantengono con maggiore probabilità le caratteristiche delle cellule in vivo
- Continui prelievi da animali o pazienti
- Condizioni di coltura più delicate
- Maggiore variabilità se isolate da soggetti diversi
Cosa prevede la regola delle 3 R?
1) Replacement: chiedersi se è possibile sostituire il modello animale con modelli non sensienti
2) Reduction: cercare il più possibile di ridurre il numero di individui nel proprio protocollo sperimentale
3) Refinement: adoperarsi per minimizzare il più possibile il livello di sofferenza imposto agli animali sperimentali
